എന്താണ് ശുദ്ധീകരണ രീതിപ്രോട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണ സംവിധാനം? ശുദ്ധീകരിച്ച പ്രോട്ടീൻ്റെ കോഡിംഗ് ഡിഎൻഎ ക്രമം അറിയേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്, ടാർഗെറ്റ് ജീനിൽ ഏതൊക്കെ കോശങ്ങളോ ടിഷ്യുകളോ അമിതമായി പീഡിപ്പിക്കപ്പെടുന്നുവെന്ന് കാണുകയും ടാർഗെറ്റ് ഡിഎൻഎ ശകലത്തിൻ്റെ ആർഫ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ജീൻ പ്രൈമറുകൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുകയും വേണം. ഇതാണ് ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ശകലങ്ങളുടെ ഏറ്റെടുക്കൽ എന്ന് വിളിക്കപ്പെടുന്നത്.

എക്സ്പ്രഷൻ വെക്റ്ററിൻ്റെ നിർമ്മാണം: ലഭിച്ച ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ്റെ സ്വഭാവസവിശേഷതകളുള്ള പ്രോകാരിയോട്ടിക് അല്ലെങ്കിൽ യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ വെക്റ്ററിൽ, പ്ലാസ്മിഡും താൽപ്പര്യമുള്ള ജീനും എക്സ്പ്രഷൻ സിസ്റ്റവും നിർമ്മിക്കുന്നതാണ് ഈ ഘട്ടത്തിൻ്റെ പ്രധാന പ്രശ്നം. പ്രോകാരിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ സമയം കുറവാണ്, ചെലവ് കുറവാണ്, കൂടാതെ ഒരു വലിയ അളവിലുള്ള പദപ്രയോഗത്തിന് മുൻഗണനയുണ്ട്; ഇ.കോളിയിൽ ജീൻ പ്രകടിപ്പിക്കുന്നില്ല, കോഡൺ ഒപ്റ്റിമൈസേഷനിലാണ് പ്രശ്നം സംഭവിക്കുന്നത്. പ്രോട്ടീൻ്റെ മികച്ച പ്രവർത്തനവും ശുദ്ധീകരണവും കണക്കിലെടുത്ത്, ഗവേഷകർ പിച്ചി യീസ്റ്റിൽ പ്രകടിപ്പിക്കാൻ തിരഞ്ഞെടുത്തു. കോഡൺ ഒപ്റ്റിമൈസേഷൻ്റെ വിജയകരമായ ആവിഷ്കാരം പ്രധാനമാണ്.

പ്രോട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണ സംവിധാനത്തിൻ്റെ ശുദ്ധീകരണ രീതി എന്താണ്:

1. മഴ.

2. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്: ചാർജ്ജ് ചെയ്ത പ്രോട്ടീൻ അതിൻ്റെ ഐസോഇലക്ട്രിക് പോയിൻ്റിനേക്കാൾ ഉയർന്നതോ താഴ്ന്നതോ ആയതിനാൽ വൈദ്യുത മണ്ഡലത്തിലെ വൈദ്യുത മണ്ഡലത്തിലെ നെഗറ്റീവ് ഇലക്ട്രോഡിലേക്കോ പോസിറ്റീവ് ഇലക്ട്രോഡിലേക്കോ നീക്കാൻ കഴിയും. ഫിലിം ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് മുതലായവയെ പിന്തുണയ്ക്കുക.

3. ഡയാലിസിസ്: പ്രോട്ടീനുകളിൽ നിന്നും ചെറിയ തന്മാത്രാ ഓർഗാനിക് സംയുക്തങ്ങളിൽ നിന്നും വലിയ തന്മാത്രകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിന് രണ്ട് ഡയാലിസിസ് ബാഗുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു രീതി.

4. ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി: അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി പ്രോട്ടീനുകളുടെ സ്വതന്ത്ര ഗുണങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഒരു പ്രത്യേക പിഎച്ച് പ്രകാരം, പ്രോട്ടീനുകളുടെ ചാർജുകളും ഗുണങ്ങളും വ്യത്യസ്തമാണ്, അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ഉപയോഗിച്ച് അവയെ വേർതിരിക്കാനാകും. അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ, കുറഞ്ഞ നെഗറ്റീവ് പവർ ഉള്ള പ്രോട്ടീനുകൾ ആദ്യം ഒഴിവാക്കപ്പെടുന്നു. ജെൽ ഫിൽട്രേഷൻ എന്നും അറിയപ്പെടുന്ന മോളിക്യുലാർ അരിപ്പകൾ. ചെറിയ പ്രോട്ടീനുകൾ സുഷിരങ്ങളിൽ പ്രവേശിക്കുകയും അവയിൽ വളരെക്കാലം നിലനിൽക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. വലിയ പ്രോട്ടീനുകൾക്ക് സുഷിരങ്ങളിൽ പ്രവേശിക്കാനും നേരിട്ട് പുറത്തേക്ക് ഒഴുകാനും കഴിയില്ല.

5. എന്താണ് ശുദ്ധീകരണ രീതിപ്രോട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണ സംവിധാനം? അൾട്രാസെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ: തന്മാത്രാ ഭാരം നിർണ്ണയിക്കാൻ പ്രോട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണം ഉപയോഗിക്കാനും പ്രോട്ടീനായി ഉപയോഗിക്കാനും കഴിയും. വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകളുള്ള പ്രോട്ടീനുകളുടെ രൂപീകരണം വേർതിരിച്ചിരിക്കുന്നു.