പ്രോട്ടീനുകളുടെ വേർതിരിവും ശുദ്ധീകരണവും ബയോകെമിസ്ട്രി ഗവേഷണത്തിലും പ്രയോഗത്തിലും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് ഒരു പ്രധാന പ്രവർത്തന വൈദഗ്ധ്യവുമാണ്. ഒരു സാധാരണ യൂക്കറിയോട്ടിക് സെല്ലിൽ ആയിരക്കണക്കിന് വ്യത്യസ്ത പ്രോട്ടീനുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കാം, ചിലത് വളരെ സമ്പന്നമാണ്, ചിലതിൽ കുറച്ച് കോപ്പികൾ മാത്രമേ അടങ്ങിയിട്ടുള്ളൂ. ഒരു നിശ്ചിത പഠനത്തിനായിപ്രോട്ടീൻ, മറ്റ് പ്രോട്ടീനുകളിൽ നിന്നും നോൺ-പ്രോട്ടീൻ തന്മാത്രകളിൽ നിന്നും ആദ്യം പ്രോട്ടീൻ ശുദ്ധീകരിക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.

1. സാൾട്ടിംഗ്-ഔട്ട് രീതിപ്രോട്ടീൻ:

ന്യൂട്രൽ ഉപ്പ് പ്രോട്ടീൻ്റെ ലയിക്കുന്നതിൽ കാര്യമായ സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു. സാധാരണയായി, കുറഞ്ഞ ഉപ്പ് സാന്ദ്രതയിൽ ഉപ്പ് സാന്ദ്രത വർദ്ധിക്കുന്നതിനനുസരിച്ച്, പ്രോട്ടീൻ്റെ ലയിക്കുന്നത വർദ്ധിക്കുന്നു. ഇതിനെ ഉപ്പിടൽ എന്ന് വിളിക്കുന്നു; ലവണത്തിൻ്റെ സാന്ദ്രത വർദ്ധിക്കുന്നത് തുടരുമ്പോൾ, പ്രോട്ടീൻ്റെ ലായകത വ്യത്യസ്ത അളവുകളിലേക്ക് കുറയുകയും ഒന്നിനുപുറകെ ഒന്നായി വേർപെടുത്തുകയും ചെയ്യുന്നു. ഈ പ്രതിഭാസത്തെ സാൾട്ടിംഗ് ഔട്ട് എന്ന് വിളിക്കുന്നു.

2. ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിൻ്റ് സ്റ്റാക്കിംഗ് രീതി:

പ്രോട്ടീൻ നിശ്ചലമാകുമ്പോൾ കണങ്ങൾ തമ്മിലുള്ള ഇലക്ട്രോസ്റ്റാറ്റിക് വികർഷണം ഏറ്റവും ചെറുതാണ്, അതിനാൽ ലയിക്കുന്നതും ഏറ്റവും ചെറുതാണ്. വിവിധ പ്രോട്ടീനുകളുടെ ഐസോഇലക്ട്രിക് പോയിൻ്റുകൾ വ്യത്യസ്തമാണ്. ഒരു പ്രോട്ടീൻ്റെ ഐസോഇലക്‌ട്രിക് പോയിൻ്റിലെത്താൻ കണ്ടീഷനിംഗ് ലായനിയുടെ pH ഉപയോഗിക്കാം, അത് ശേഖരിക്കുക, എന്നാൽ ഈ രീതി വളരെ അപൂർവമായി മാത്രമേ ഉപയോഗിക്കാറുള്ളൂ, മാത്രമല്ല ഇത് ഉപ്പിടൽ രീതിയുമായി സംയോജിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യാം.

3.ഡയാലിസിസും അൾട്രാഫിൽട്രേഷനും:

വ്യത്യസ്ത തന്മാത്രാ വലുപ്പത്തിലുള്ള പ്രോട്ടീനുകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിന് ഡയാലിസിസ് ഒരു സെമി-പെർമെബിൾ മെംബ്രൺ ഉപയോഗിക്കുന്നു. അൾട്രാഫിൽട്രേഷൻ രീതി ഉയർന്ന മർദ്ദമോ അപകേന്ദ്രബലമോ ഉപയോഗിച്ച് വെള്ളവും മറ്റ് ചെറിയ ലായക തന്മാത്രകളും ഒരു സെമി-പെർമെബിൾ മെംബ്രണിലൂടെ കടന്നുപോകാൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു.പ്രോട്ടീൻമെംബ്രണിൽ അവശേഷിക്കുന്നു. വ്യത്യസ്ത തന്മാത്രാ ഭാരമുള്ള പ്രോട്ടീനുകളെ തടസ്സപ്പെടുത്താൻ നിങ്ങൾക്ക് വ്യത്യസ്ത സുഷിരങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കാം.

4.ജെൽ ഫിൽട്ടറേഷൻ രീതി:

സൈസ് എക്‌സ്‌ക്ലൂഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി അല്ലെങ്കിൽ മോളിക്യുലാർ സീവ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി എന്നും വിളിക്കുന്നു, ഇത് തന്മാത്രാ വലുപ്പത്തിനനുസരിച്ച് പ്രോട്ടീൻ മിശ്രിതങ്ങളെ വേർതിരിക്കുന്നതിനുള്ള ഏറ്റവും ഉപയോഗപ്രദമായ രീതികളിലൊന്നാണ്. കോളത്തിൽ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന പാക്കിംഗ് മെറ്റീരിയലുകൾ ഗ്ലൂക്കോസ് ജെൽ (സെഫാഡെക്സ് ജെഡ്), അഗറോസ് ജെൽ (അഗറോസ് ജെൽ) എന്നിവയാണ്.

5. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്:

ഒരേ pH അവസ്ഥയിൽ, വ്യത്യസ്ത തന്മാത്രാ ഭാരവും വൈദ്യുത മണ്ഡലത്തിലെ വ്യത്യസ്ത ചാർജുകളും കാരണം വിവിധ പ്രോട്ടീനുകളെ വേർതിരിക്കാനാകും. ഐസോഇലക്ട്രിക് സെറ്റ് ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ശ്രദ്ധിക്കുന്നത് മൂല്യവത്താണ്, അത് ഒരു ആംഫോലൈറ്റ് ഒരു കാരിയർ ആയി ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയത്ത്, പോസിറ്റീവ് ഇലക്ട്രോഡിൽ നിന്ന് നെഗറ്റീവ് ഇലക്ട്രോഡിലേക്ക് ക്രമേണ ചേർക്കുന്ന പിഎച്ച് ഗ്രേഡിയൻ്റ് ആംഫോലൈറ്റ് ഉണ്ടാക്കുന്നു. ഒരു നിശ്ചിത ചാർജുള്ള പ്രോട്ടീൻ അതിൽ നീന്തുമ്പോൾ, അത് പരസ്പരം എത്തും. ഇലക്ട്രിക്കൽ പോയിൻ്റിൻ്റെ പിഎച്ച് സ്ഥാനം തുടർച്ചയായി തുടരുന്നില്ല, വിവിധ പ്രോട്ടീനുകൾ വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിനും തയ്യാറാക്കുന്നതിനും ഈ രീതി ഉപയോഗിക്കാം.

6. അയോൺ കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി:

അയോൺ കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ഏജൻ്റുമാരിൽ കാറ്റാനിക് കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ഏജൻ്റുമാരും (കാർബോക്സിമെതൈൽ സെല്ലുലോസ്; CM-സെല്ലുലോസ് പോലുള്ളവ) അയോണിക് കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ഏജൻ്റുമാരും (ഡൈഥൈലാമിനോഇഥൈൽ സെല്ലുലോസ്) ഉൾപ്പെടുന്നു. അയോൺ കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളത്തിലൂടെ കടന്നുപോകുമ്പോൾ, അയോൺ കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ഏജൻ്റിന് വിപരീത ചാർജുള്ള പ്രോട്ടീൻ അയോൺ കമ്മ്യൂണിക്കേഷൻ ഏജൻ്റിൽ ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുന്നു, തുടർന്ന് ആഡ്സോർബഡ്പ്രോട്ടീൻpH അല്ലെങ്കിൽ അയോണിക് ശക്തി മാറ്റുന്നതിലൂടെ ഒഴിവാക്കപ്പെടുന്നു.

7.അഫിനിറ്റി ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി:

പ്രോട്ടീനുകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിനുള്ള വളരെ ഉപയോഗപ്രദമായ രീതിയാണ് അഫിനിറ്റി ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി. ഉയർന്ന പരിശുദ്ധിയുള്ള ഒരു കുഴപ്പമുള്ള പ്രോട്ടീൻ മിശ്രിതത്തിൽ നിന്ന് ശുദ്ധീകരിക്കാൻ ഒരു നിശ്ചിത പ്രോട്ടീൻ വേർതിരിക്കുന്നതിന് പലപ്പോഴും ഒരു ഘട്ടം മാത്രമേ ആവശ്യമുള്ളൂ.

ലിഗാൻഡ് (ലിഗാൻഡ്) എന്ന മറ്റൊരു തന്മാത്രയുമായി ചില പ്രോട്ടീനുകളുടെ കോവാലൻ്റ് ബൈൻഡിംഗിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ് ഈ രീതി.

അടിസ്ഥാന തത്വം:

പ്രോട്ടീനുകൾ ടിഷ്യൂകളിലോ കോശങ്ങളിലോ കലർന്ന മിശ്രിതത്തിൽ നിലവിലുണ്ട്, ഓരോ തരം കോശത്തിലും ആയിരക്കണക്കിന് വ്യത്യസ്ത പ്രോട്ടീനുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. അതിനാൽ, പ്രോട്ടീനുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസം ബയോകെമിസ്ട്രിയുടെ ഒരു പ്രധാന ഭാഗമാണ്, അത് ഒറ്റയ്ക്കായിരുന്നില്ല. അല്ലെങ്കിൽ ഒരു കൂട്ടം റെഡിമെയ്ഡ് രീതികൾ ഒരു കുഴപ്പം കലർന്ന പ്രോട്ടീനിൽ നിന്ന് ഏതെങ്കിലും തരത്തിലുള്ള പ്രോട്ടീൻ നീക്കം ചെയ്യാൻ കഴിയും, അതിനാൽ പല രീതികളും സംയോജിതമായി ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട്.