Одвојувањето и прочистувањето на протеините е широко користено во биохемиското истражување и примена и е важна оперативна вештина. Типична еукариотска клетка може да содржи илјадници различни протеини, некои се многу богати, а некои содржат само неколку копии. Со цел да се изучи одреденпротеин, потребно е прво да се прочисти протеинот од други протеини и непротеински молекули.

1. Метод на солење напротеин:

Неутралната сол има значително влијание врз растворливоста на протеините. Општо земено, со зголемување на концентрацијата на сол при ниска концентрација на сол, се зголемува растворливоста на протеинот. Ова се нарекува солење; кога концентрацијата на сол продолжува да се зголемува, растворливоста на протеинот се намалува до различен степен и се одвојува еден по друг. Овој феномен се нарекува солење надвор.

2. Метод на редење на изоелектрична точка:

Електростатското одбивање помеѓу честичките е најмало кога протеинот е статичен, па така и растворливоста е најмала. Изоелектричните точки на различни протеини се различни. рН на растворот за кондиционирање може да се користи за да се достигне изоелектричната точка на протеинот Да се ​​акумулира, но овој метод ретко се користи самостојно и може да се комбинира со методот на солење.

3. Дијализа и ултрафилтрација:

Дијализата користи полупропустлива мембрана за одвојување на протеини со различна молекуларна големина. Методот на ултрафилтрација користи висок притисок или центрифугална сила за да направи водата и другите мали молекули на растворени материи да поминат низ полупропустлива мембрана, додекапротеиностанува на мембраната. Можете да изберете различни големини на порите за да пресретнете протеини со различна молекуларна тежина.

4. Метод на филтрирање на гел:

Исто така наречена хроматографија со исклучување на големина или хроматографија со молекуларно сито, ова е еден од најкорисните методи за одвојување на протеинските мешавини според молекуларната големина. Најчесто користени материјали за пакување во колоната се гликозен гел (Sephadex ged) и агарозен гел (агарозен гел).

5. Електрофореза:

Под иста pH состојба, различни протеини може да се одвојат поради нивната различна молекуларна тежина и различни полнежи во електричното поле. Вреди да се обрне внимание на изоелектричната сет електрофореза, која користи амфолит како носител. За време на електрофорезата, амфолитот формира градиент на pH кој постепено се додава од позитивната електрода до негативната електрода. Кога протеинот со одреден полнеж ќе заплива во него, тој ќе стигне еден до друг. рН позицијата на електричната точка е дисконтинуирана и овој метод може да се користи за анализа и подготовка на различни протеини.

6. Јонска комуникациска хроматографија:

јонските комуникациски агенси вклучуваат катјонски комуникациски агенси (како што е карбоксиметил целулоза; CM-целулоза) и анјонски комуникациски агенси (диетиламиноетил целулоза). Кога минува низ колоната за јонска комуникациска хроматографија, протеинот со спротивен полнеж на јонскиот комуникациски агенс се адсорбира на средството за јонска комуникација, а потоа се адсорбирапротеинсе елуира со промена на pH или јонска јачина.

7. Афинитетна хроматографија:

Афинитетната хроматографија е исклучително корисен метод за одвојување на протеините. Честопати е потребен само еден чекор за да се одвои одреден протеин за да се прочисти од неуредна протеинска мешавина со висока чистота.

Овој метод се заснова на специфично, а не на ковалентно врзување на одредени протеини со друга молекула наречена лиганд (Лиганд).

Основниот принцип:

протеините постојат во неуредна мешавина во ткивата или клетките, а секој тип на клетка содржи илјадници различни протеини. Затоа, разликата помеѓу протеините е важен дел од биохемијата и тоа не е единствено. Или збир на готови методи може да отстрани секаков вид на протеин од неуреден мешан протеин, па често се користат неколку методи во комбинација.