Kāda ir attīrīšanas metodeolbaltumvielu attīrīšanas sistēma? Ir jāzina attīrītā proteīna kodējošā DNS secība, lai redzētu, kuras šūnas vai audi ir pārmērīgi ekspresēti mērķa gēnā, un jāprojektē gēnu praimeri, lai pastiprinātu mērķa DNS fragmenta arf. Tā ir tā sauktā mērķa gēnu fragmentu iegūšana.

Ekspresijas vektora konstruēšana: Prokariotu vai eikariotu ekspresijas vektorā ar paša iegūtā gēna ekspresijas īpašībām šī soļa galvenā problēma ir plazmīdas un interesējošā gēna un ekspresijas sistēmas konstruēšana. Prokariotu izpausmes laiks ir īss, izmaksas ir zemas, un prioritāte ir lielam izteiksmes apjomam; gēns nav ekspresēts E. coli, un problēma rodas kodona optimizācijā. Ņemot vērā proteīna labāku aktivitāti un attīrīšanu, pētnieki izvēlējās ekspresēt Pichi raugā. Svarīga ir veiksmīga kodona optimizācijas izpausme.

Kāda ir olbaltumvielu attīrīšanas sistēmas attīrīšanas metode:

1. Nokrišņi.

2. Elektroforēze: uzlādēts proteīns ir augstāks vai zemāks par tā izoelektrisko punktu, un to var pārvietot uz elektriskā lauka negatīvo elektrodu vai pozitīvo elektrodu. Atbalsta plēves elektroforēze, elektroforēze utt.

3. Dialīze: metode, kas izmanto divus dialīzes maisus, lai atdalītu lielas molekulas no olbaltumvielām un mazmolekulāriem organiskiem savienojumiem.

4. Hromatogrāfija: jonu apmaiņas hromatogrāfijā izmanto proteīnu brīvās īpašības. Pie noteikta pH līmeņa proteīnu lādiņi un īpašības atšķiras, un tos var atdalīt ar jonu apmaiņas hromatogrāfiju. Anjonu apmaiņas hromatogrāfijā vispirms tiek eluēti proteīni ar zemu negatīvo jaudu. Molekulārie sieti, kas pazīstami arī kā gēla filtrēšana. Mazie proteīni iekļūst porās un paliek tajās ilgu laiku. Lieli proteīni nevar iekļūt porās un tieši izplūst.

5. Kāda ir attīrīšanas metodeolbaltumvielu attīrīšanas sistēma? Ultracentrifugēšana: Olbaltumvielu attīrīšanu var izmantot, lai noteiktu molekulmasu, un to var izmantot kā proteīnu. Proteīnu veidošanās ar dažādu blīvumu tiek atdalīta.