Olbaltumvielu atdalīšana un attīrīšana tiek plaši izmantota bioķīmijas pētījumos un lietošanā, un tā ir svarīga darbības prasme. SCG proteīna attīrīšanas sistēmas uzņēmums-Saipu instruments ir apkopojis neapstrādātas atdalīšanas un smalkās atdalīšanas saturuolbaltumvielasattīrīšana ikvienam. Tipiskā eikariotu šūna var saturēt tūkstošiem dažādu proteīnu, daži ir ļoti bagāti un daži satur tikai dažas kopijas. Lai pētītu noteiktu proteīnu, vispirms ir jāattīra proteīns no citiem proteīniem un ne-olbaltumvielu molekulām.

Rupja atdalīšana

Kad iegūts proteīna ekstrakts (dažkārt sajaukts ar nukleīnskābēm, polisaharīdiem utt.), tiek izvēlēts atbilstošo metožu kopums, lai atdalītu vēlamo.olbaltumvielasno citiem piemaisījumiem. Parasti šajā atdalīšanas posmā tiek izmantotas tādas metodes kā izsālīšana, izoelektriskā punkta uzkrāšanās un organiskā šķīdinātāja frakcionēšana. Šīs metodes raksturo vienkāršība un liela apstrādes jauda, ​​kas var noņemt daudzus piemaisījumus un koncentrēt olbaltumvielu šķīdumu. Dažiem proteīna ekstraktiem ir liels tilpums un tie nav piemēroti koncentrēšanai, akumulējot vai izsāļojot. Koncentrēšanai varat izvēlēties ultrafiltrāciju, gēlfiltrāciju, sasaldēšanas vakuuma žāvēšanu vai citas metodes.

Smalka atdalīšana

Pēc parauga rupjas frakcionēšanas tilpums parasti ir mazs, un lielākā daļa piemaisījumu ir noņemti. Turpmākai attīrīšanai hromatogrāfijas metodes parasti ietver gēla filtrēšanu, jonu apmaiņas hromatogrāfiju, adsorbcijas hromatogrāfiju un afinitātes hromatogrāfiju. Ja nepieciešams, kā galīgo attīrīšanas procesu var izvēlēties arī elektroforēzi, tai skaitā zonas elektroforēzi, izoelektrisko punktu komplektu utt. Apakšnodaļas līmeņa atdalīšanai izmantotā metode parasti ir neliela plānošanā, bet ar augstu izšķirtspēju.

Kristalizācija ir pēdējais olbaltumvielu atdalīšanas un attīrīšanas process. Lai gan kristalizācijas process nenodrošina, ka proteīnam jābūt viendabīgam, tas notiek tikai tad, kad noteiktam proteīnam ir priekšrocība šķīdumā, veidojot kristālu. Pats kristalizācijas process ir saistīts ar noteiktu attīrīšanas pakāpi, un pārkristalizācija var noņemt nelielu daudzumu viltota proteīna. Kopš denaturētaolbaltumvielasnekad nav konstatēts kristalizācijas procesā, olbaltumvielu kristalizācija ir ne tikai tīrības pazīme, bet arī spēcīgs norādījums, lai noteiktu, vai produkts ir tā dabiskajā stāvoklī.