Nukleīnskābi iedala dezoksiribonukleīnskābē (DNS) un ribonukleīnskābē (RNS), starp kurām RNS var iedalīt ribosomu RNS (rRNS), ziņojuma RNS (mRNS) un pārneses RNS (tRNS) atbilstoši dažādām funkcijām.

DNS galvenokārt koncentrējas kodolā, mitohondrijās un hloroplastos, savukārt RNS galvenokārt izplatās citoplazmā.

Tā kā purīna bāzēm un pirimidīna bāzēm ir konjugētas dubultās saites nukleīnskābēs, nukleīnskābēm piemīt ultravioletās absorbcijas īpašības. DNS nātrija sāļu ultravioletā absorbcija ir aptuveni 260 nm, un tās absorbcija ir izteikta kā A260, un tā atrodas pie absorbcijas zemākās vietas pie 230 nm, tāpēc var izmantot ultravioleto spektroskopiju. Nukleīnskābes kvantitatīvi un kvalitatīvi nosaka ar luminometru.

Nukleīnskābes ir amfoliti, kas ir līdzvērtīgi poliskābēm. Nukleīnskābes var sadalīt anjonos, izmantojot neitrālus vai sārmainus buferus, un ievietot elektriskajā laukā, lai virzītos uz anodu. Tas ir elektroforēzes princips.

Nukleīnskābju ekstrakcijas un attīrīšanas principi un prasības

1. Nodrošināt nukleīnskābes primārās struktūras integritāti

2. Novērsiet citu molekulu piesārņojumu (piemēram, izslēdziet RNS traucējumus, ekstrahējot DNS).

3. Nukleīnskābju paraugos nedrīkst būt organiski šķīdinātāji un augstas koncentrācijas metālu joni, kas inhibē enzīmus.

4. Cik vien iespējams, samaziniet makromolekulāro vielu, piemēram, proteīnu, polisaharīdu un lipīdu daudzumu.

Nukleīnskābju ekstrakcijas un attīrīšanas metode

1. Fenola/hloroforma ekstrakcijas metode

Tas tika izgudrots 1956. gadā. Pēc šūnu šķelto šķidrumu vai audu homogenāta apstrādes ar fenolu/hloroformu nukleīnskābes komponenti, galvenokārt DNS, tiek izšķīdināti ūdens fāzē, lipīdi galvenokārt atrodas organiskajā fāzē, un olbaltumvielas atrodas starp šīm divām fāzēm. fāzes.

2. Spirta nogulsnes

Etanols var likvidēt nukleīnskābes hidratācijas slāni un atklāt negatīvi lādēto fosfātu grupu, un pozitīvi lādētie joni, piemēram, NA﹢, var apvienoties ar fosfātu grupu, veidojot nogulsnes.

3. Hromatogrāfiskās kolonnas metode

Izmantojot īpašu adsorbcijas materiālu uz silīcija dioksīda bāzes, DNS var īpaši adsorbēties, savukārt RNS un olbaltumvielas var vienmērīgi iziet cauri, un pēc tam izmantot augstu sāli un zemu pH, lai saistītu nukleīnskābi, un eluētu ar zemu sāli un augstu pH, lai atdalītu un attīrītu nukleīnu. skābe.

4. Termiskā krekinga sārmu metode

Sārmainās ekstrakcijas procesā galvenokārt tiek izmantotas topoloģiskās atšķirības starp kovalenti noslēgtām apļveida plazmīdām un lineāro hromatīnu, lai tās atdalītu. Sārmainos apstākļos denaturētie proteīni ir šķīstoši.

5. Viršanas pirolīzes metode

DNS šķīdums tiek termiski apstrādāts, lai izmantotu lineāro DNS molekulu īpašības, lai atdalītu DNS fragmentus no nogulsnēm, ko veido denaturēti proteīni un šūnu atliekas, centrifugējot.

6. Nanomagnētisko lodīšu metode

Izmantojot nanotehnoloģiju, lai uzlabotu un modificētu superparamagnētisko nanodaļiņu virsmu, tiek sagatavotas superparamagnētiskās silīcija oksīda nanomagnētiskās lodītes. Magnētiskās lodītes var īpaši atpazīt un efektīvi saistīties ar nukleīnskābes molekulām mikroskopiskā saskarnē. Izmantojot silīcija dioksīda nanosfēru superparamagnētiskās īpašības, haotropo sāļu (guanidīna hidrohlorīda, guanidīna izotiocianāta uc) un ārējā magnētiskā lauka iedarbībā no asinīm, dzīvnieku audiem, pārtikas, patogēniem mikroorganismiem un citiem paraugiem tika izolētas DNS un RNS.