Metodes,olbaltumvielu attīrīšana:

Olbaltumvielu attīrīšanas, atdalīšanas un attīrīšanas metode, proteīns tiek atbrīvots no sākotnējām šūnām vai audiem izšķīdinātā stāvoklī un saglabājas sākotnējā dabiskajā stāvoklī, nezaudējot bioloģisko aktivitāti. Šī iemesla dēļ materiālam ir jānoņem dzīvnieku un taukaudi, sēklu materiālam vajadzētu pat nolobīt sēklu apvalka piesārņojumu no tādām vielām kā tanīni, un eļļas sēklām vēlams izmantot organisko šķīdinātāju ar zemu viršanas temperatūru.

1. Olbaltumvielu attīrīšanas metode, lieluma un dažādas atdalīšanas analīzes metodes: dialīze un ultrafiltrācija izmanto šos proteīnus, lai izietu cauri molekulām, kuras nevar iziet cauri puscaurlaidīgajai membrānai; blīvuma gradienta centrifugēšana Olbaltumvielu kvalitātei un blīvumam barotnē būs lielāka ietekme uz daļiņām. Nosēšanās ātrums ir ātrāks; Gēla filtrēšana ir sava veida kolonnu hromatogrāfija.

2. Šķīdības atšķirības atdalīšana lietošanā: elektroprecipitācija, jo olbaltumvielu molekulu neto lādiņš ir nulles izoelektriskajā punktā, samazinot elektrostatisko atgrūšanos starp molekulām, viegli agregējama un minimāla šķīdība; sāls šķīdums, ko lieto kopā ar sāls šķīdumu Koncentrācija palielina vai samazina proteīna šķīdību.

3. Lādiņu atdala un analizē ar dažādām metodēm, galvenais saturs ietver elektroforēzi un jonu apmaiņas hromatogrāfiju.

4. Metodesolbaltumvielu attīrīšanaOlbaltumvielu selektīvā adsorbcija un atdalīšana izmanto daļiņu adsorbcijas spēku.

5. Afinitātes hromatogrāfijas pamatā ir ligandu atdalīšana. Šī bioloģiskā īpašība ļauj olbaltumvielu molekulām specifiski, nevis kovalenti saistīties ar citu molekulu, ko sauc par ligandu.

6. Olbaltumvielu attīrīšanas metode: Zemas temperatūras organisko šķīdinātāju izgulsnēšanas metode: izmantojiet organiskos šķīdinātājus, kas sajaucas ar ūdeni, piemēram, metanolu, etanolu, lai samazinātu vairuma olbaltumvielu šķīdību un izgulsnēšanos. Šī metode ir augstāka par izsālīšanas izšķirtspēju, bet proteīns denaturējas vairāk Kad tas ir viegli, tas jādara zemā temperatūrā.

Kā attīrītiesolbaltumvielu attīrīšana:

Kā attīrīt olbaltumvielas, olbaltumvielas ir liela molekula un dažādi molekulārie albumīna izmēri, ir dažas vienkāršākas metodes olbaltumvielu un mazo molekulu materiālu atdalīšanai, kā arī atdalīto olbaltumvielu maisījumu. Galvenās dažādu molekulu izmēru proteīnu atdalīšanas metodes ir dialīze, ultrafiltrācija, gēla filtrēšana un centrbēdzes atdalīšana. Olbaltumvielu atdalīšanas metodēs parasti izmanto dialīzi un ultrafiltrāciju. Atdalāmo dialīzes maisījumu ievieto dialīzes maisā, kas izgatavots no puscaurlaidīgas membrānas, un pēc tam iegremdē dialīzes šķīdumā atdalīšanai. Ultrafiltrācija ir process, kurā ūdeni un citas mazas molekulas laiž cauri puscaurlaidīgā membrānā, izmantojot centrbēdzes spēku vai spiedienu, un proteīnu ieslodzīšanu puscaurlaidīgajā membrānā. Šīs divas metodes var atdalīt no makromolekulām, kuru pamatā ir olbaltumvielas, un mazām molekulām, kuru pamatā ir neorganiskās sāls. Tos bieži izsālī, izmanto kopā ar sāls šķīdināšanas metodi, vai arī var ieviest, lai izņemtu šīs divas metodes pēc izsālīšanas, izmantojot neorganiskos sāls šķīdumus.

1. Kā attīrīt proteīnu ar izsālīšanas metodi: Izsālīšanas metodes pamatā ir tas, ka, palielinoties sāls koncentrācijai, palielinās olbaltumvielu šķīdība atšķaidītā sāls šķīdumā, bet, palielinoties sāls koncentrācijai līdz noteiktai vērtībai, tiks palielināta ūdens aktivitāte. Samazinājums, kas savukārt var izraisīt dažu proteīnu lādiņu veidošanos caur molekulārās struktūras virsmu, kas pakāpeniski tiek neitralizēta, un hidratācijas membrāna tiek pakāpeniski iznīcināta, kas galu galā var izraisīt saistīto olbaltumvielu un molekulu aglomerāciju un nogulsnēšanos no dažādiem šķīdumiem.

2. Organisko šķīdinātāju izgulsnēšanas metode: Ir divi iemesli, lai samazinātu olbaltumvielu šķīdību organiskajos šķīdinātājos: kā attīrīt proteīnu kā sāls šķīdumu ar dehidratāciju; otrkārt, organisko šķīdinātāju dielektrisko konstanti nekā ūdens var samazināt Polārajos šķīdinātājos.

3. Olbaltumvielu izgulsnēšanas līdzeklis: proteīns kā izgulsnētājs iedarbojas tikai uz viena veida proteīnu izgulsnēšanos, izplatītākās ir sārmains, proteīns, lektīns un smagie metāli.

4. Polietilēnglikola izgulsnēšana: kā attīrīt ūdenī šķīstošos nejonu polimērusolbaltumvielu attīrīšana, piemēram, polietilēnglikolu un nātrija dekstrāna sulfātu, lai nogulsnētu olbaltumvielas.