Nukleino rūgštis skirstoma į dezoksiribonukleino rūgštį (DNR) ir ribonukleino rūgštį (RNR), tarp kurių RNR pagal skirtingas funkcijas gali būti suskirstyta į ribosominę RNR (rRNR), pasiuntinio RNR (mRNR) ir pernešimo RNR (tRNR).

DNR daugiausia koncentruojasi branduolyje, mitochondrijose ir chloroplastuose, o RNR daugiausia pasiskirsto citoplazmoje.

Kadangi purino bazės ir pirimidino bazės turi konjuguotų dvigubų jungčių nukleorūgštyse, nukleino rūgštys turi ultravioletinių spindulių absorbcijos ypatybes. DNR natrio druskų ultravioletinė absorbcija yra apie 260 nm, o jos absorbcija išreiškiama kaip A260, o absorbcija yra 230 nm, todėl galima naudoti ultravioletinę spektroskopiją. Nukleino rūgštys kiekybiškai ir kokybiškai nustatomos luminometru.

Nukleorūgštys yra amfolitai, kurie yra lygiaverčiai polirūgštims. Nukleino rūgštys gali būti išskaidytos į anijonus naudojant neutralius arba šarminius buferius ir patalpintos į elektrinį lauką, kad judėtų link anodo. Tai yra elektroforezės principas.

Nukleino rūgščių ekstrahavimo ir gryninimo principai ir reikalavimai

1. Užtikrinti nukleorūgščių pirminės struktūros vientisumą

2. Pašalinkite kitų molekulių užteršimą (pvz., neįtraukite RNR trukdžių ekstrahuojant DNR).

3. Nukleino rūgščių mėginiuose neturėtų būti organinių tirpiklių ir didelės koncentracijos metalų jonų, kurie slopina fermentus.

4. Kiek įmanoma sumažinkite stambiamolekulinių medžiagų, tokių kaip baltymai, polisacharidai ir lipidai

Nukleino rūgščių ekstrahavimo ir gryninimo metodas

1. Fenolio/chloroformo ekstrahavimo metodas

Jis buvo išrastas 1956 m. Apdorojus ląstelių skaldytą skystį arba audinių homogenatą fenoliu/chloroformu, nukleino rūgšties komponentai, daugiausia DNR, ištirpinami vandeninėje fazėje, lipidai daugiausia yra organinėje fazėje, o baltymai yra tarp šių dviejų. fazės.

2. Alkoholio nusodinimas

Etanolis gali pašalinti hidratacijos nukleorūgšties sluoksnį ir atskleisti neigiamai įkrautą fosfato grupę, o teigiamai įkrauti jonai, tokie kaip NA﹢, gali susijungti su fosfato grupe ir sudaryti nuosėdas.

3. Chromatografinės kolonėlės metodas

Naudojant specialią adsorbcinę medžiagą silicio dioksido pagrindu, DNR gali būti specifiškai adsorbuota, o RNR ir baltymai gali prasiskverbti sklandžiai, tada naudoti didelę druską ir žemą pH nukleino rūgštims surišti, o eliuuoti su maža druska ir aukštu pH, kad atskirtų ir išgrynintų nukleino rūgštis. rūgšties.

4. Terminis krekingo šarminis metodas

Šarminis ekstrahavimas daugiausia naudoja topologinius skirtumus tarp kovalentiškai uždarytų žiedinių plazmidžių ir linijinio chromatino, kad jas atskirtų. Šarminėmis sąlygomis denatūruoti baltymai yra tirpūs.

5. Virimo pirolizės metodas

DNR tirpalas termiškai apdorojamas, kad būtų galima pasinaudoti linijinių DNR molekulių savybėmis ir atskirti DNR fragmentus nuo nuosėdų, susidarančių iš denatūruotų baltymų ir ląstelių šiukšlių centrifuguojant.

6. Nanomagnetinių karoliukų metodas

Nanotechnologijomis tobulinant ir modifikuojant superparamagnetinių nanodalelių paviršių, paruošiami superparamagnetiniai silicio oksido nanomagnetiniai rutuliukai. Magnetiniai rutuliukai gali konkrečiai atpažinti ir efektyviai prisijungti prie nukleorūgščių molekulių mikroskopinėje sąsajoje. Naudojant superparamagnetines silicio dioksido nanosferų savybes, veikiant chaotropinėms druskoms (guanidino hidrochloridui, guanidino izotiocianatui ir kt.) ir išoriniam magnetiniam laukui, DNR ir RNR buvo išskirtos iš kraujo, gyvūnų audinių, maisto, patogeninių mikroorganizmų ir kitų mėginių.