Baltymų atskyrimas ir gryninimas yra plačiai naudojamas biochemijos tyrimuose ir taikyme ir yra svarbus veiklos įgūdis. Įprastoje eukariotų ląstelėje gali būti tūkstančiai skirtingų baltymų, kai kurie yra labai turtingi, o kai kuriuose yra tik kelios kopijos. Norėdami ištirti tam tikrąbaltymų, pirmiausia būtina išvalyti baltymą nuo kitų baltymų ir nebaltyminių molekulių.

1. Išsūdymo metodasbaltymų:

Neutrali druska turi didelę įtaką baltymų tirpumui. Paprastai, padidėjus druskos koncentracijai esant mažai druskos koncentracijai, baltymų tirpumas didėja. Tai vadinama sūdymu; toliau didėjant druskos koncentracijai, Baltymų tirpumas įvairiais laipsniais mažėja ir išsiskiria vienas po kito. Šis reiškinys vadinamas išsūdymu.

2. Izoelektrinio taško sukrovimo metodas:

Elektrostatinis atstūmimas tarp dalelių yra mažiausias, kai baltymas yra statinis, todėl tirpumas taip pat yra mažiausias. Įvairių baltymų izoelektriniai taškai skiriasi. Kondicionavimo tirpalo pH gali būti naudojamas norint pasiekti baltymo izoelektrinį tašką, kad jis kauptųsi, tačiau šis metodas retai naudojamas atskirai ir gali būti derinamas su išsūdymo metodu.

3. Dializė ir ultrafiltravimas:

Dializės metu naudojama pusiau pralaidi membrana, skirta atskirti skirtingų molekulinių dydžių baltymus. Ultrafiltravimo metodas naudoja aukštą slėgį arba išcentrinę jėgą, kad vanduo ir kitos mažos ištirpusių medžiagų molekulės praeitų per pusiau pralaidžią membraną, obaltymųlieka ant membranos. Galite pasirinkti skirtingus porų dydžius, kad sulaikytumėte skirtingo molekulinio svorio baltymus.

4. Gelio filtravimo metodas:

Taip pat vadinama dydžio išskyrimo chromatografija arba molekulinio sieto chromatografija, tai yra vienas iš naudingiausių baltymų mišinių atskyrimo pagal molekulinį dydį metodų. Kolonėlėje dažniausiai naudojamos pakavimo medžiagos yra gliukozės gelis (Sephadex ged) ir agarozės gelis (agarozės gelis).

5. Elektroforezė:

Esant toms pačioms pH sąlygoms, įvairūs baltymai gali būti atskirti dėl skirtingos molekulinės masės ir skirtingų krūvių elektriniame lauke. Verta atkreipti dėmesį į izoelektrinę rinkinio elektroforezę, kurios metu kaip nešiklis naudojamas amfolitas. Elektroforezės metu amfolitas sudaro pH gradientą, palaipsniui pridedamą nuo teigiamo elektrodo prie neigiamo elektrodo. Kai baltymas su tam tikru krūviu jame plauks, pasieks vienas kitą. Elektrinio taško pH padėtis yra nenutrūkstama, todėl šiuo metodu galima analizuoti ir paruošti įvairius baltymus.

6. Jonų ryšio chromatografija:

jonų ryšio agentai apima katijonines komunikacijos priemones (pvz., karboksimetilceliuliozę; CM-celiuliozę) ir anijonines ryšio priemones (dietilaminoetilceliuliozę). Praeinant per jonų ryšio chromatografijos kolonėlę, baltymas, kurio krūvis priešingas jonų perdavimo agentui, adsorbuojamas ant jonų ryšio agento, o tada adsorbuojamas.baltymųeliuuojamas keičiant pH arba jonų stiprumą.

7. Afininė chromatografija:

Afininė chromatografija yra labai naudingas baltymų atskyrimo metodas. Norint atskirti tam tikrą baltymą nuo netvarkingo didelio grynumo baltymų mišinio, dažnai reikia tik vieno žingsnio.

Šis metodas pagrįstas specifiniu, o ne kovalentiniu tam tikrų baltymų prisijungimu prie kitos molekulės, vadinamos ligandu (ligandu).

Pagrindinis principas:

baltymai egzistuoja netvarkingame mišinyje audiniuose ar ląstelėse, o kiekvieno tipo ląstelėse yra tūkstančiai skirtingų baltymų. Todėl baltymų atskyrimas yra svarbi biochemijos dalis, ir ji nebuvo vienintelė. Arba paruoštų metodų rinkinys gali pašalinti bet kokį baltymą iš netvarkingo mišraus baltymo, todėl dažnai naudojami keli metodai.