D'Trennung an d'Reinigung vu Proteinen gëtt wäit an der Biochemiefuerschung an Uwendung benotzt an ass eng wichteg operationell Fäegkeet. Eng typesch eukaryot Zell kann Dausende vu verschiddene Proteinen enthalen, e puer si ganz räich an e puer enthalen nëmmen e puer Exemplare. Fir e bestëmmt ze studéierenprotein, ass et néideg fir d'éischt de Protein aus anere Proteinen an Net-Protein Molekülen ze purifizéieren.

1. Salting-eraus Method vunprotein:

Neutral Salz huet e wesentlechen Effekt op d'Léisbarkeet vum Protein. Allgemeng, mat der Erhéijung vun der Salzkonzentratioun ënner enger gerénger Salzkonzentratioun, erhéicht d'Léisbarkeet vum Protein. Dëst gëtt Salzen genannt; wann d'Salzkonzentratioun weider eropgeet, D'Léisbarkeet vum Protein fällt a variéierend Grad of a trennt sech een nom aneren. Dëse Phänomen gëtt aussalzen genannt.

2. Isoelektresch Punkt Stacking Method:

D'elektrostatesch Oflehnung tëscht Partikelen ass déi klengst wann de Protein statesch ass, sou datt d'Léislechkeet och déi klengst ass. D'isoelektresch Punkte vu verschiddene Proteine ​​sinn ënnerschiddlech. De pH vun der Konditionéierungsléisung ka benotzt ginn fir den isoelektresche Punkt vun engem Protein z'erreechen Maacht et accumuléiert, awer dës Method gëtt selten eleng benotzt a ka mat der Aussalzmethod kombinéiert ginn.

3.Dialyse an Ultrafiltratioun:

Dialyse benotzt eng semi-permeabel Membran fir Proteine ​​vu verschiddene molekulare Gréissten ze trennen. D'Ultrafiltratiounsmethod benotzt Héichdrock oder Zentrifugalkraaft fir Waasser an aner kleng Solutemoleküle duerch eng semi-permeabel Membran ze maachen, wärend deproteinbleift op der Membran. Dir kënnt verschidde Pore Gréisste wielen fir Proteine ​​vu verschiddene Molekulargewiicht z'ënnerscheeden.

4.Gel Filtratiounsmethod:

Och genannt Gréisst Ausgrenzung Chromatographie oder Molekulare Sief Chromatographie, dëst ass eng vun den nëtzlechsten Methoden fir Proteinmëschungen no molekulare Gréisst ze trennen. Déi méi allgemeng benotzt Verpackungsmaterialien an der Kolonn sinn Glukosgel (Sephadex ged) an Agarosegel (Agarosegel).

5. Elektrophorese:

Ënnert deemselwechte pH-Konditioun kënne verschidde Proteine ​​​​getrennt ginn wéinst hire verschiddene Molekulargewiichter a verschidde Ladungen am elektresche Feld. Et ass derwäert oppassen op isoelektresch Set Elektrophorese, déi en Ampholyt als Träger benotzt. Wärend der Elektrophorese formt den Ampholyt e pH-Gradient graduell vun der positiver Elektrode op déi negativ Elektrode bäigefüügt. Wann de Protein mat enger bestëmmter Ladung dran schwëmmt, da wäert et sech erreechen. D'PH Positioun vum elektresche Punkt ass diskontinuéierlech, an dës Method kann benotzt ginn fir verschidde Proteinen ze analyséieren an ze preparéieren.

6.Ion Kommunikatioun Chromatographie:

Ionkommunikatiounsmëttelen enthalen kationesch Kommunikatiounsmëttelen (wéi Carboxymethylcellulose; CM-cellulose) an anionesche Kommunikatiounsmëttelen (Diethylaminoethylcellulose). Wann Dir duerch d'Ionkommunikatiounschromatographiekolonn passéiert, gëtt de Protein mat der Géigendeel Ladung zum Ionkommunikatiounsmëttel op den Ionkommunikatiounsmëttel adsorbéiert, an dann den adsorbéiertenproteingëtt eluéiert andeems de pH oder d'ionesch Stäerkt geännert gëtt.

7. Affinitéitschromatographie:

Affinitéitschromatographie ass eng extrem nëtzlech Method fir Proteinen ze trennen. Et erfuerdert dacks nëmmen ee Schrëtt fir e bestëmmte Protein ze trennen fir aus enger mësslecher Proteinmëschung mat héijer Rengheet gereinegt ze ginn.

Dës Method baséiert op der spezifescher anstatt kovalenter Bindung vu bestëmmte Proteinen un eng aner Molekül genannt Ligand (Ligand).

Basis Prinzip:

Proteinen existéieren an enger knaschteg Mëschung an Stoffer oder Zellen, an all Zort Zell enthält Dausende vu verschiddene Proteinen. Dofir ass den Ënnerscheed tëscht Proteinen e wichtege Bestanddeel vun der Biochemie, an et war net eleng. Oder e Set vu fäerdege Methoden kann all Zort Protein aus engem messy gemëschte Protein ewechhuelen, sou datt verschidde Methoden dacks a Kombinatioun benotzt ginn.