Тазалоо ыкмасы кандайбелок тазалоо системасы? Тазаланган протеиндин коддоочу ДНК ырааттуулугун билүү, максаттуу генде кайсы клеткалар же ткандар ашыкча экспрессияланганын көрүү жана максаттуу ДНК фрагментинин арфын күчөтүү үчүн ген праймерлерин долбоорлоо зарыл. Бул максаттуу ген фрагменттерин алуу деп аталат.

Экспрессия векторунун курулушу: Алынган ген экспрессиясынын мүнөздөмөлөрү менен прокариоттук же эукариоттук экспрессия векторунда бул кадамдын негизги маселеси плазмиданы жана кызыккан генди жана экспрессия системасын куруу болуп саналат. Прокариоттук экспрессия убактысы кыска, баасы төмөн жана экспрессиянын чоң көлөмү артыкчылыктуу; ген E. coliде көрсөтүлбөйт жана көйгөй кодонду оптималдаштырууда пайда болот. Белоктун активдүүлүгүн жана тазаланышын эске алып, изилдөөчүлөр Пичи ачыткысында экспрессиялоону тандашкан. Кодонду оптималдаштырууну ийгиликтүү билдирүү маанилүү.

Протеинди тазалоо системасынын тазалоо ыкмасы кандай:

1. Жаан-чачын.

2. Электрофорез: Заряддалган белок изоэлектрдик чекитинен жогору же төмөн жана терс электродго же электр талаасындагы электр талаасынын оң электродуна жылдырылышы мүмкүн. Колдоо пленка электрофорез, электрофорез, ж.б.

3. Диализ: чоң молекулаларды белоктордон жана майда молекулалык органикалык бирикмелерден бөлүү үчүн эки диализ баштыкчасын колдонгон ыкма.

4. Хроматография: Ион алмашуу хроматографиясы белоктордун эркин касиеттерин колдонот. Белгилүү бир рН шартында белоктордун заряддары жана касиеттери ар кандай болот жана аларды ион алмашуу хроматографиясы менен ажыратууга болот. Анион алмашуу хроматографиясында биринчи кезекте терс күчү аз белоктор элюталанат. Молекулярдык электер, ошондой эле гел чыпкалоо катары белгилүү. Майда белоктор тешикчелерге кирип, аларда көпкө калат. Чоң протеиндер тешикчелерге кирип түз агып чыга албайт.

5. Тазалоо ыкмасы кандайбелок тазалоо системасы? Ultracentrifugation: Протеинди тазалоо молекулярдык салмакты аныктоо үчүн колдонулушу мүмкүн жана белок катары колдонулушу мүмкүн. Ар кандай тыгыздыктагы белоктордун пайда болушу бөлүнөт.