Белокторду бөлүү жана тазалоо биохимияны изилдөөдө жана колдонууда кеңири колдонулат жана маанилүү операциялык чеберчилик болуп саналат. Кадимки эукариоттук клетка миңдеген түрдүү белокторду камтышы мүмкүн, кээ бирлери абдан бай, кээ бирлери бир нече гана көчүрмөнү камтыйт. Белгилүү бир нерсени изилдөө үчүнбелок, адегенде белокту башка белоктордон жана белок эмес молекулалардан тазалоо керек.

1. Туздоо ыкмасыбелок:

Нейтралдуу туз белоктун эригичтигине олуттуу таасирин тийгизет. Негизинен туздун аз концентрациясында туздун концентрациясынын жогорулашы менен белоктун эригичтиги жогорулайт. Бул туздоо деп аталат; туздун концентрациясы жогорулай бергенде, белоктун эригичтиги ар кандай даражада төмөндөп, биринин артынан бири бөлүнүп чыгат. Бул көрүнүш туздануу деп аталат.

2. Изоэлектрдик чекиттерди топтоо ыкмасы:

Белок статикалык болгондо бөлүкчөлөрдүн ортосундагы электростатикалык түртүүлөр эң кичине болот, ошондуктан эригичтиги да эң кичине. Ар кандай белоктордун изоэлектрдик чекиттери ар түрдүү. Кондициялоочу эритменин рНы белоктун изоэлектрдик чекитине жетүү үчүн колдонулушу мүмкүн, аны топтоо, бирок бул ыкма сейрек колдонулат жана аны туздоо ыкмасы менен айкалыштырса болот.

3.Диализ жана ультрафильтрация:

Диализ ар кандай молекулалык өлчөмдөгү белокторду бөлүү үчүн жарым өткөргүч мембрананы колдонот. Ультрафильтрация ыкмасы жарым өткөргүч мембрана аркылуу суу жана башка майда эриген зат молекулаларын өткөрүү үчүн жогорку басымды же борбордон четтөөчү күчтү колдонот.белокмембранада калат. Сиз ар кандай молекулярдык салмактагы белокторду кармап туруу үчүн ар кандай тешикчелердин өлчөмүн тандай аласыз.

4.Gel чыпкалоо ыкмасы:

Өлчөмдү жокко чыгаруу хроматографиясы же молекулярдык электен жасалган хроматография деп да аталат, бул протеин аралашмаларын молекулярдык өлчөмүнө жараша бөлүү үчүн эң пайдалуу ыкмалардын бири. Колонкада кеңири колдонулган таңгактоочу материалдар глюкоза гели (Sephadex ged) жана агароз гели (агароза гели) болуп саналат.

5. Электрофорез:

Ошол эле рН шартында, ар кандай протеиндерди электр талаасындагы ар кандай молекулярдык салмактарга жана ар кандай заряддарга байланыштуу ажыратууга болот. Ташуучу катары амфолиттерди колдонгон изоэлектрдик электрофорезге көңүл буруу зарыл. Электрофорез учурунда амфолит оң электроддон терс электродго акырындык менен кошулган рН градиентин түзөт. Белгилүү бир заряды бар белок сүзгөндө бири-бирине жетет. Электрдик чекиттин рН абалы үзгүлтүксүз жана бул ыкма ар кандай протеиндерди талдоо жана даярдоо үчүн колдонулушу мүмкүн.

6.Иондук байланыш хроматографиясы:

иондук байланыш агенттерине катиондук байланыш агенттери (мисалы, карбоксиметил целлюлоза; CM-целлюлоза) жана аниондук байланыш агенттери (диэтиламиноэтил целлюлоза) кирет. Иондук байланыш хроматографиясынын колонкасынан өткөндө иондук байланыш агентине карама-каршы заряддагы белок иондук байланыш агентине адсорбцияланат, андан кийин адсорбцияланат.белокрН же иондук күчтү өзгөртүү менен элюталанат.

7. Жакындык хроматографиясы:

Жакындык хроматографиясы белокторду бөлүү үчүн абдан пайдалуу ыкма болуп саналат. Ал көп учурда жогорку тазалыгы менен баш аламан протеин аралашмасынан тазаланган белгилүү бир протеинди бөлүү үчүн бир гана кадамды талап кылат.

Бул ыкма белгилүү бир белоктордун лиганд (Лиганд) деп аталган башка молекула менен коваленттик эмес, спецификалык байланышына негизделген.

Негизги принцип:

белоктор кыртыштарда же клеткаларда башаламан аралашмада болот жана клетканын ар бир түрү миңдеген түрдүү белокторду камтыйт. Ошондуктан белоктордун ортосундагы айырмачылык биохимиянын маанилүү бөлүгү жана ал жалгыз болгон эмес. Же даяр ыкмалардын жыйындысы башаламан аралаш протеинден ар кандай протеинди алып салышы мүмкүн, ошондуктан бир нече ыкмалар көбүнчө айкалыштырып колдонулат.