методдорубелок тазалоо:

Белокту тазалоо, белокту ажыратуу жана тазалоо ыкмасы, белок баштапкы клеткалардан же ткандардан эриген абалда бөлүнүп чыгат жана биологиялык активдүүлүгүн жоготпостон баштапкы табигый абалында калат. Ушул себептен улам, материал жаныбарлардын жана май ткандарын жок кылышы керек, үрөн материалы ал тургай, таннин сыяктуу заттардан урук кабыгынын булганышын тазалап, майлуу үрөн жакшыраак кайнаган органикалык эриткичти колдонушу керек.

1. белок тазалоо ыкмасы, өлчөмү жана ар кандай бөлүү талдоо ыкмалары: диализ жана ultrafiltration жарым өткөргүч мембрана аркылуу өтө албаган молекулалардын табияты аркылуу өтүп, бул белокторду колдонуу; тыгыздык градиентти центрифугалоо чөйрөдөгү белоктун сапаты жана тыгыздыгы бөлүкчөлөргө көбүрөөк таасирин тийгизет. Орнотуу ылдамдыгы тезирээк; гел фильтрлөө колонна хроматографиясынын бир түрү.

2. Колдонуудагы эригичтиктин айырмасын бөлүү: белок молекулаларынын таза заряды нөлдүк изоэлектрдик чекитте болгондуктан, электро-чаңдоолор, молекулалар арасындагы электростатикалык түртүүнү азайтуу, бириктирүү оңой жана минималдуу эригичтик; туз эритмеси менен колдонулган туз эритмеси концентрация белоктун эригичтигин жогорулатат же азайтат.

3. Заряд ар кандай ыкмалар менен бөлүнөт жана талданат, негизги мазмунуна электрофорез жана ион алмашуу хроматографиясы кирет.

4. Методдорубелок тазалооБелоктордун тандалма адсорбциясы жана бөлүнүшү бөлүкчөлөрдүн адсорбциясынын күчүн пайдаланат.

5. Жакындык хроматографиясы лиганддарды бөлүүгө негизделген. Бул биологиялык мүнөздөмөсү белок молекулаларынын лиганд деп аталган башка молекулага коваленттүү эмес, атайын байланышуусуна мүмкүндүк берет.

6. Протеинди тазалоо ыкмасы: Төмөн температурадагы органикалык эриткичти тундургуч ыкмасы: Көпчүлүк белоктордун эригичтигин жана чөкмөлүгүн азайтуу үчүн метанол, этанол сыяктуу суу менен аралашкан органикалык эриткичтерди колдонуңуз. Бул ыкма резолюцияны туздоодон жогору, бирок белок көбүрөөк денатурат болот. Жеңил болгондо, аны төмөнкү температурада жасоо керек.

Кантип тазалайтбелок тазалоо:

Протеинди кантип тазалоо керек, белок чоң молекула жана альбуминдин ар кандай молекулярдык өлчөмдөрү, протеинди жана майда молекулалык материалдарды, ошондой эле бөлүнгөн протеин аралашмасын бөлүп алуунун бир нече жөнөкөй ыкмалары бар. Ар түрдүү молекулярдык өлчөмдөгү белокторду бөлүүнүн негизги ыкмалары диализ, ультра фильтрация, гель фильтрациясы жана борбордон тепкич менен бөлүү болуп саналат. Диализ жана ультра фильтрация протеинди бөлүү ыкмаларында кеңири колдонулат. Бөлүнүүчү диализ аралашмасы жарым өткөргүч мембранадан жасалган диализдик баштыкка салынып, андан кийин бөлүү үчүн диализдик эритмеге батырылат. Ультрафильтрация – жарым өткөргүч мембранада борбордон четтөөчү күч же басым аркылуу сууну жана башка майда молекулаларды өткөрүү жана жарым өткөргүч мембранада белокторду кармоо процесси. Бул эки ыкманы протеинге негизделген макромолекулалардан жана органикалык эмес туздун негизиндеги майда молекулалардан бөлүүгө болот. Алар көп учурда туздалат, туз эритүү ыкмасы менен бирге колдонулат, же органикалык эмес туз эритмелери аркылуу туздоо кийин бул эки ыкманы алуу үчүн киргизилиши мүмкүн.

1. Белокту туздоо ыкмасы менен кантип тазалоо керек: Туздоо ыкмасынын негизи туздун концентрациясынын көбөйүшү менен белоктун суюлтулган туз эритмесинде эригичтиги жогорулайт, ал эми туздун концентрациясы белгилүү бир мааниге жеткенде, суунун активдуулугу жогорулайт. Төмөндөө, бул өз кезегинде кээ бир белоктордун молекулярдык түзүлүш бети аркылуу заряддарды пайда кылуусуна алып келиши мүмкүн, акырындык менен нейтралдаштырылган, ал эми гидратациялык мембрана акырындык менен бузулат, бул акырында байланышкан протеиндердин жана молекулалардын агломерациясын өнүктүрүүгө жана ар кандай эритмелерден чөктүрүүгө алып келиши мүмкүн.

2. Органикалык эриткичти тундургуч ыкмасы: Органикалык эриткичтерде белоктун эригичтигин төмөндөтүүнүн эки себеби бар: белокту туз эритмеси катары суусуздандыруу менен кантип тазалоо керек; экинчиден, сууга караганда органикалык эриткичтердин диэлектрдик өткөрүмдүүлүгү полярдык эриткичтерде азайтылышы мүмкүн.

3. Протеинди чөктүрүүчү агент: белок преципитациялоочу агент катары белоктун бир түрүнө же бирине гана таасир этет, кеңири таралгандары щелоч, белок, лектин жана оор металлдар.

4. Полиэтиленгликолдун тундурмасы: сууда эрүүчү иондук эмес полимерлерди кантип тазалоо керекбелок тазалоо, мисалы, полиэтиленгликол жана натрий декстран сульфаты белокторду тумоо үчүн.