ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನ ಯಾವುದುಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆ? ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ನ ಕೋಡಿಂಗ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ತಿಳಿದುಕೊಳ್ಳುವುದು ಅವಶ್ಯಕವಾಗಿದೆ, ಗುರಿಯ ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಯಾವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಅತಿಯಾಗಿ ಒತ್ತಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನೋಡಲು ಮತ್ತು ಗುರಿಯ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕಿನ ಆರ್ಫ್ ಅನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಜೀನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವುದು ಅವಶ್ಯಕ. ಇದು ಗುರಿ ಜೀನ್ ತುಣುಕುಗಳ ಸ್ವಾಧೀನ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ.

ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವೆಕ್ಟರ್ ನಿರ್ಮಾಣ: ಪಡೆದ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೊಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಥವಾ ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವೆಕ್ಟರ್‌ನಲ್ಲಿ, ಈ ಹಂತದ ಮುಖ್ಯ ಸಮಸ್ಯೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಮತ್ತು ಆಸಕ್ತಿಯ ಜೀನ್ ಮತ್ತು ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸುವುದು. ಪ್ರೊಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಸಮಯವು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ವೆಚ್ಚ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಆದ್ಯತೆಯಾಗಿದೆ; ಜೀನ್ ಅನ್ನು E. ಕೊಲಿಯಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಕೋಡಾನ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಮಸ್ಯೆ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಉತ್ತಮ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಿ, ಸಂಶೋಧಕರು ಪಿಚಿ ಯೀಸ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದರು. ಕೋಡಾನ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ನ ಯಶಸ್ವಿ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನ ಯಾವುದು:

1. ಮಳೆ.

2. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್: ಚಾರ್ಜ್ಡ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅದರ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್‌ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಕ್ಕೆ ಅಥವಾ ವಿದ್ಯುತ್ ಕ್ಷೇತ್ರದ ವಿದ್ಯುತ್ ಕ್ಷೇತ್ರದ ಧನಾತ್ಮಕ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಕ್ಕೆ ಚಲಿಸಬಹುದು. ಬೆಂಬಲ ಫಿಲ್ಮ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್, ಇತ್ಯಾದಿ.

3. ಡಯಾಲಿಸಿಸ್: ದೊಡ್ಡ ಅಣುಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಆಣ್ವಿಕ ಸಾವಯವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಎರಡು ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಚೀಲಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ವಿಧಾನ.

4. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ: ಅಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್ಚೇಂಜ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಉಚಿತ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ pH ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಶುಲ್ಕಗಳು ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಿಂದ ಅವುಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಬಹುದು. ಅಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್ಚೇಂಜ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ, ಕಡಿಮೆ ಋಣಾತ್ಮಕ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಮೊದಲು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆಣ್ವಿಕ ಜರಡಿಗಳನ್ನು ಜೆಲ್ ಶೋಧನೆ ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ. ಸಣ್ಣ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ರಂಧ್ರಗಳನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಕಾಲ ಉಳಿಯುತ್ತವೆ. ದೊಡ್ಡ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ರಂಧ್ರಗಳನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಲು ಮತ್ತು ನೇರವಾಗಿ ಹರಿಯುವುದಿಲ್ಲ.

5. ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನ ಯಾವುದುಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆ? ಅಲ್ಟ್ರಾಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್: ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿ ಬಳಸಬಹುದು. ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.