ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯದಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಕಾರ್ಯಾಚರಣಾ ಕೌಶಲ್ಯವಾಗಿದೆ. ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಯೂಕ್ಯಾರಿಯೋಟಿಕ್ ಕೋಶವು ಸಾವಿರಾರು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಕೆಲವು ಅತ್ಯಂತ ಶ್ರೀಮಂತವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಕೆಲವೇ ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲುಪ್ರೋಟೀನ್, ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಲ್ಲದ ಅಣುಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಮೊದಲು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದು ಅವಶ್ಯಕ.

1. ಸಾಲ್ಟಿಂಗ್-ಔಟ್ ವಿಧಾನಪ್ರೋಟೀನ್:

ತಟಸ್ಥ ಉಪ್ಪು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಕರಗುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಗಮನಾರ್ಹ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಕಡಿಮೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ, ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಕರಗುವಿಕೆ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. ಇದನ್ನು ಸಾಲ್ಟಿಂಗ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ; ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚುತ್ತಲೇ ಹೋದಾಗ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಕರಗುವಿಕೆಯು ವಿವಿಧ ಹಂತಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಒಂದರ ನಂತರ ಒಂದರಂತೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಈ ವಿದ್ಯಮಾನವನ್ನು ಸಾಲ್ಟಿಂಗ್ ಔಟ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

2. ಐಸೊಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್ ಪೇರಿಸುವ ವಿಧಾನ:

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವಾಗ ಕಣಗಳ ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ವಿಕರ್ಷಣೆಯು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಕರಗುವಿಕೆಯು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿರುತ್ತದೆ. ವಿವಿಧ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಬಿಂದುಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ. ಕಂಡೀಷನಿಂಗ್ ದ್ರಾವಣದ pH ಅನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಬಿಂದುವನ್ನು ತಲುಪಲು ಬಳಸಬಹುದು, ಆದರೆ ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಪರೂಪವಾಗಿ ಮಾತ್ರ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಉಪ್ಪು ಹಾಕುವ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು.

3.ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್:

ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ವಿಭಿನ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಅರೆ-ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯ ಪೊರೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡ ಅಥವಾ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಬಲವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನೀರು ಮತ್ತು ಇತರ ಸಣ್ಣ ದ್ರಾವಕ ಅಣುಗಳನ್ನು ಅರೆ-ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಪ್ರೋಟೀನ್ಪೊರೆಯ ಮೇಲೆ ಉಳಿದಿದೆ. ವಿಭಿನ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ನೀವು ವಿಭಿನ್ನ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬಹುದು.

4.ಜೆಲ್ ಶೋಧನೆ ವಿಧಾನ:

ಸೈಜ್ ಎಕ್ಸ್‌ಕ್ಲೂಷನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಅಥವಾ ಆಣ್ವಿಕ ಜರಡಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ, ಇದು ಆಣ್ವಿಕ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಕಾರ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಅತ್ಯಂತ ಉಪಯುಕ್ತ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ. ಅಂಕಣದಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ವಸ್ತುಗಳು ಗ್ಲುಕೋಸ್ ಜೆಲ್ (ಸೆಫಾಡೆಕ್ಸ್ ಜಿಡ್) ಮತ್ತು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ (ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್).

5. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್:

ಒಂದೇ pH ಸ್ಥಿತಿಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, ವಿವಿಧ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ವಿಭಿನ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿನ ವಿಭಿನ್ನ ಚಾರ್ಜ್‌ಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಬಹುದು. ಐಸೊಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಸೆಟ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ಗೆ ಗಮನ ಕೊಡುವುದು ಯೋಗ್ಯವಾಗಿದೆ, ಇದು ಆಂಫೋಲೈಟ್ ಅನ್ನು ವಾಹಕವಾಗಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಆಂಫೋಲೈಟ್ ಧನಾತ್ಮಕ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರದಿಂದ ಋಣಾತ್ಮಕ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಕ್ಕೆ ಕ್ರಮೇಣ ಸೇರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ pH ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಚಾರ್ಜ್ ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅದರಲ್ಲಿ ಈಜಿದಾಗ, ಅದು ಪರಸ್ಪರ ತಲುಪುತ್ತದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕಲ್ ಪಾಯಿಂಟ್‌ನ pH ಸ್ಥಾನವು ನಿರಂತರವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಮತ್ತು ತಯಾರಿಸಲು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.

6. ಅಯಾನು ಸಂವಹನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ:

ಅಯಾನು ಸಂವಹನ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಟಯಾನಿಕ್ ಸಂವಹನ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಮಿಥೈಲ್ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್; CM-ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್) ಮತ್ತು ಅಯಾನಿಕ್ ಸಂವಹನ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳು (ಡೈಥೈಲಾಮಿನೋಥೈಲ್ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್) ಸೇರಿವೆ. ಅಯಾನು ಸಂವಹನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಕಾಲಮ್ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುವಾಗ, ಅಯಾನು ಸಂವಹನ ಏಜೆಂಟ್‌ಗೆ ವಿರುದ್ಧವಾದ ಚಾರ್ಜ್ ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಅಯಾನು ಸಂವಹನ ಏಜೆಂಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಆಡ್ಸರ್ಬ್ಡ್ಪ್ರೋಟೀನ್pH ಅಥವಾ ಅಯಾನಿಕ್ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.

7. ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ:

ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಅತ್ಯಂತ ಉಪಯುಕ್ತ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಶುದ್ಧತೆಯೊಂದಿಗೆ ಗೊಂದಲಮಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಿಶ್ರಣದಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕೇವಲ ಒಂದು ಹೆಜ್ಜೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.

ಈ ವಿಧಾನವು ಲಿಗಾಂಡ್ (ಲಿಗಾಂಡ್) ಎಂಬ ಮತ್ತೊಂದು ಅಣುವಿಗೆ ಕೆಲವು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ.

ಮೂಲ ತತ್ವ:

ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಗೊಂದಲಮಯ ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಯೊಂದು ರೀತಿಯ ಜೀವಕೋಶವು ಸಾವಿರಾರು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಭಾಗವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದು ಏಕಾಂಗಿಯಾಗಿಲ್ಲ. ಅಥವಾ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ವಿಧಾನಗಳ ಒಂದು ಸೆಟ್ ಗೊಂದಲಮಯ ಮಿಶ್ರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನಿಂದ ಯಾವುದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಹಲವಾರು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.