ವಿಧಾನಗಳುಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ:

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ, ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ವಿಧಾನ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮೂಲ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಂದ ಕರಗಿದ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ನಷ್ಟವಿಲ್ಲದೆಯೇ ಮೂಲ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ. ಈ ಕಾರಣಕ್ಕಾಗಿ, ವಸ್ತುವು ಪ್ರಾಣಿ ಮತ್ತು ಅಡಿಪೋಸ್ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕು, ಬೀಜದ ವಸ್ತುವು ಟ್ಯಾನಿನ್‌ಗಳಂತಹ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಂದ ಬೀಜದ ಕೋಟ್‌ನ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸಹ ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕು ಮತ್ತು ಎಣ್ಣೆ ಬೀಜವು ಕಡಿಮೆ ಕುದಿಯುವ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕವನ್ನು ಬಳಸಬೇಕು.

1. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ವಿಧಾನ, ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ವಿಧಾನಗಳು: ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಅರೆ-ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗದ ಅಣುಗಳ ಸ್ವಭಾವದ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗಲು ಬಳಸುತ್ತದೆ; ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಗುಣಮಟ್ಟ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಕಣಗಳ ಮೇಲೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಸೆಟ್ಲಿಂಗ್ ವೇಗವು ವೇಗವಾಗಿರುತ್ತದೆ; ಜೆಲ್ ಶೋಧನೆಯು ಒಂದು ರೀತಿಯ ಕಾಲಮ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಾಗಿದೆ.

2. ಬಳಕೆಯಲ್ಲಿನ ಕರಗುವ ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ: ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋ-ಅವಕ್ಷೇಪ ಏಕೆಂದರೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಣುಗಳ ನಿವ್ವಳ ಚಾರ್ಜ್ ಶೂನ್ಯ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್‌ನಲ್ಲಿದೆ, ಅಣುಗಳ ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ವಿಕರ್ಷಣೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸಲು ಸುಲಭ, ಮತ್ತು ಕನಿಷ್ಠ ಕರಗುವಿಕೆ; ಉಪ್ಪಿನ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವ ಉಪ್ಪಿನ ದ್ರಾವಣವು ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

3. ಚಾರ್ಜ್ ಅನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮುಖ್ಯ ವಿಷಯಗಳಲ್ಲಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಸೇರಿವೆ.

4. ವಿಧಾನಗಳುಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಆಯ್ದ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯು ಕಣದ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆಯ ಬಲವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

5. ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಈ ಜೈವಿಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣವು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಣುಗಳನ್ನು ಲಿಗಂಡ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುವ ಮತ್ತೊಂದು ಅಣುವಿಗೆ ಕೋವೆಲನ್ಸಿಯ ಬದಲಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಬಂಧಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ.

6. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ವಿಧಾನ: ಕಡಿಮೆ-ತಾಪಮಾನದ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕ ಅವಕ್ಷೇಪನ ವಿಧಾನ: ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಕರಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಮಳೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಮೆಥನಾಲ್, ಎಥೆನಾಲ್‌ನಂತಹ ನೀರಿನೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಯುವ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ. ಈ ವಿಧಾನವು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸಾಲ್ಟಿಂಗ್ ಔಟ್‌ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನದಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಹೆಚ್ಚು ಡಿನೇಚರ್ಸ್ ಸುಲಭವಾದಾಗ, ಅದನ್ನು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಮಾಡಬೇಕು.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದು ಹೇಗೆಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ:

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದು ಹೇಗೆ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ದೊಡ್ಡ ಅಣು, ಮತ್ತು ಅಲ್ಬುಮಿನ್ನ ವಿವಿಧ ಆಣ್ವಿಕ ಗಾತ್ರಗಳು, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಅಣು ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಕೆಲವು ಸರಳವಾದ ವಿಧಾನಗಳಿವೆ, ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ. ವಿಭಿನ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಮುಖ್ಯ ವಿಧಾನಗಳೆಂದರೆ ಡಯಾಲಿಸಿಸ್, ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್, ಜೆಲ್ ಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬೇರ್ಪಡಿಸಬೇಕಾದ ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಸೆಮಿಪರ್ಮಿಯಬಲ್ ಮೆಂಬರೇನ್‌ನಿಂದ ಮಾಡಿದ ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಬ್ಯಾಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಮುಳುಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ ಎನ್ನುವುದು ಅರೆ-ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಬಲ ಅಥವಾ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನೀರು ಮತ್ತು ಇತರ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳನ್ನು ಹಾದುಹೋಗುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಅರೆ-ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಲೆಗೆ ಬೀಳಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಆಧಾರಿತ ಸ್ಥೂಲ ಅಣುಗಳು ಮತ್ತು ಅಜೈವಿಕ ಉಪ್ಪು-ಆಧಾರಿತ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಬಹುದು. ಅವುಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಉಪ್ಪು ಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಉಪ್ಪು ಕರಗಿಸುವ ವಿಧಾನದ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಥವಾ ಅಜೈವಿಕ ಉಪ್ಪು ದ್ರಾವಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಉಪ್ಪು ಹಾಕಿದ ನಂತರ ಈ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲು ಪರಿಚಯಿಸಬಹುದು.

1. ಸಾಲ್ಟಿಂಗ್-ಔಟ್ ವಿಧಾನದಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದು ಹೇಗೆ: ಉಪ್ಪು ಹಾಕುವ ವಿಧಾನದ ಆಧಾರವೆಂದರೆ ದುರ್ಬಲ ಉಪ್ಪಿನ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಕರಗುವಿಕೆಯು ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಾದಾಗ, ನೀರಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗುವುದು. ಇಳಿಕೆ, ಇದು ಪ್ರತಿಯಾಗಿ ಕೆಲವು ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು ಆಣ್ವಿಕ ರಚನೆಯ ಮೇಲ್ಮೈ ಮೂಲಕ ಚಾರ್ಜ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಕ್ರಮೇಣ ತಟಸ್ಥಗೊಳ್ಳಲು ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಮತ್ತು ಜಲಸಂಚಯನ ಪೊರೆಯು ಕ್ರಮೇಣ ನಾಶವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಅಣುಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸಲು ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಪರಿಹಾರಗಳಿಂದ ಅವಕ್ಷೇಪಿಸಲು ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.

2. ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕ ಅವಕ್ಷೇಪನ ವಿಧಾನ: ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಎರಡು ಕಾರಣಗಳಿವೆ: ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದೊಂದಿಗೆ ಉಪ್ಪು ದ್ರಾವಣವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದು; ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಧ್ರುವೀಯ ದ್ರಾವಕಗಳಲ್ಲಿ ನೀರಿಗಿಂತ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳ ಡೈಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಸ್ಥಿರಾಂಕವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು.

3. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅವಕ್ಷೇಪಕ ಏಜೆಂಟ್: ಪ್ರೋಟೀನು ಒಂದು ಅವಕ್ಷೇಪಕ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಕೇವಲ ಒಂದು ರೀತಿಯ ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅವಕ್ಷೇಪನದ ಮೇಲೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾದವುಗಳು ಕ್ಷಾರೀಯ, ಪ್ರೋಟೀನ್, ಲೆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಭಾರ ಲೋಹಗಳು.

4. ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಅವಕ್ಷೇಪ: ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುವ ಅಯಾನಿಕ್ ಅಲ್ಲದ ಪಾಲಿಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಹೇಗೆ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದುಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಮತ್ತು ಸೋಡಿಯಂ ಡೆಕ್ಸ್ಟ್ರಾನ್ ಸಲ್ಫೇಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಅವಕ್ಷೇಪಿಸಲು.