ការបំបែក និងការបន្សុតប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងការស្រាវជ្រាវ និងការអនុវត្តជីវគីមី ហើយជាជំនាញប្រតិបត្តិការដ៏សំខាន់។ កោសិកា eukaryotic ធម្មតា​អាច​ផ្ទុក​ប្រូតេអ៊ីន​ខុសៗ​គ្នា​រាប់​ពាន់ ដែល​ខ្លះ​សម្បូរ​ណាស់ ហើយ​ខ្លះ​មាន​តែ​ពីរបី​ច្បាប់​ប៉ុណ្ណោះ។ ដើម្បីសិក្សាជាក់លាក់ប្រូតេអ៊ីនជាដំបូង វាចាំបាច់ក្នុងការបន្សុទ្ធប្រូតេអ៊ីនពីប្រូតេអ៊ីន និងម៉ូលេគុលដែលមិនមែនជាប្រូតេអ៊ីនផ្សេងទៀត។

1. វិធីសាស្រ្តអំបិលចេញនៃប្រូតេអ៊ីន:

អំបិលអព្យាក្រឹតមានឥទ្ធិពលយ៉ាងសំខាន់លើការរលាយនៃប្រូតេអ៊ីន។ ជាទូទៅជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃកំហាប់អំបិលក្រោមកំហាប់អំបិលទាប ភាពរលាយនៃប្រូតេអ៊ីនកើនឡើង។ នេះត្រូវបានគេហៅថា salting; នៅពេលដែលកំហាប់អំបិលបន្តកើនឡើង ភាពរលាយនៃប្រូតេអ៊ីនថយចុះដល់កម្រិតផ្សេងៗគ្នា ហើយបំបែកចេញពីគ្នាទៅវិញទៅមក។ បាតុភូតនេះត្រូវបានគេហៅថា salting out ។

2. វិធីសាស្រ្តជង់ចំណុច Isoelectric៖

ការច្រានចោលអេឡិចត្រូស្ទិចរវាងភាគល្អិតគឺតូចបំផុតនៅពេលដែលប្រូតេអ៊ីនឋិតិវន្ត ដូច្នេះភាពរលាយក៏តូចបំផុតដែរ។ ចំនុច isoelectric នៃប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗគឺខុសគ្នា។ pH នៃ​ដំណោះស្រាយ​ម៉ាស៊ីន​ត្រជាក់​អាច​ត្រូវ​បាន​ប្រើ​ដើម្បី​ឈាន​ដល់​ចំណុច isoelectric នៃ​ប្រូតេអ៊ីន​មួយ​ដែល​ធ្វើ​ឱ្យ​វា​កកកុញ ប៉ុន្តែ​វិធីសាស្ត្រ​នេះ​កម្រ​ត្រូវ​បាន​គេ​ប្រើ​តែ​ម្នាក់​ឯង​ហើយ​អាច​ត្រូវ​បាន​ផ្សំ​ជាមួយ​នឹង​វិធីសាស្ត្រ​អំបិល​ចេញ​។

3. ការលាងឈាម និងអ៊ុលត្រាសោនៈ

ការលាងឈាមប្រើភ្នាសពាក់កណ្តាល permeable ដើម្បីបំបែកប្រូតេអ៊ីនដែលមានទំហំម៉ូលេគុលខុសៗគ្នា។ វិធីសាស្ត្រ ultrafiltration ប្រើសម្ពាធខ្ពស់ ឬកម្លាំង centrifugal ដើម្បីធ្វើឱ្យទឹក និងម៉ូលេគុលរលាយតូចៗផ្សេងទៀតឆ្លងកាត់ភ្នាសពាក់កណ្តាល permeable ខណៈដែលប្រូតេអ៊ីននៅសល់នៅលើភ្នាស។ អ្នកអាចជ្រើសរើសទំហំរន្ធញើសខុសៗគ្នា ដើម្បីស្ទាក់ចាប់ប្រូតេអ៊ីនដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុលខុសៗគ្នា។

4. វិធីសាស្ត្រចម្រោះជែល៖

ត្រូវបានគេហៅផងដែរថា chromatography ការដកទំហំ ឬ chromatography ម៉ូលេគុល sieve នេះគឺជាវិធីសាស្រ្តដ៏មានប្រយោជន៍បំផុតមួយសម្រាប់ការបំបែកល្បាយប្រូតេអ៊ីនទៅតាមទំហំម៉ូលេគុល។ សមា្ភារៈវេចខ្ចប់ដែលប្រើញឹកញាប់ជាងនៅក្នុងជួរឈរគឺជែលគ្លុយកូស (Sephadex ged) និងជែល agarose (ជែល agarose) ។

5. Electrophoresis:

នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ pH ដូចគ្នា ប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗអាចត្រូវបានបំបែកចេញពីគ្នាដោយសារតែទម្ងន់ម៉ូលេគុលផ្សេងគ្នា និងបន្ទុកផ្សេងគ្នានៅក្នុងវាលអគ្គិសនី។ វាគួរអោយយកចិត្តទុកដាក់ចំពោះសំណុំ isoelectric electrophoresis ដែលប្រើ ampholyte ជាក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូន។ កំឡុងពេល electrophoresis អំពែរបង្កើតជាជម្រាល pH ត្រូវបានបន្ថែមបន្តិចម្តងៗពីអេឡិចត្រូតវិជ្ជមានទៅអេឡិចត្រូតអវិជ្ជមាន។ នៅពេលដែលប្រូតេអ៊ីនដែលមានបន្ទុកជាក់លាក់មួយហែលនៅក្នុងវា វានឹងទៅដល់គ្នាទៅវិញទៅមក។ ទីតាំង pH នៃចំណុចអគ្គិសនីគឺមិនបន្ត ហើយវិធីសាស្ត្រនេះអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីវិភាគ និងរៀបចំប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗ។

6. Ion chromatography ទំនាក់ទំនង៖

ភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុង រួមមានភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងស៊ីតូទិក (ដូចជា carboxymethyl cellulose; CM-cellulose) និងភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនង anionic (diethylaminoethyl cellulose)។ នៅពេលឆ្លងកាត់ជួរទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុងក្រូម៉ាតូក្រាម ប្រូតេអ៊ីនដែលមានបន្ទុកផ្ទុយទៅនឹងភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុងត្រូវបានស្រូបយកនៅលើភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុង ហើយបន្ទាប់មកត្រូវបានស្រូបយក។ប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានបំប្លែងដោយការផ្លាស់ប្តូរ pH ឬកម្លាំងអ៊ីយ៉ុង។

7. Affinity chromatography៖

Affinity chromatography គឺជាវិធីសាស្រ្តដ៏មានប្រយោជន៍បំផុតសម្រាប់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីន។ ជារឿយៗវាទាមទារតែមួយជំហានប៉ុណ្ណោះ ដើម្បីបំបែកប្រូតេអ៊ីនជាក់លាក់មួយ ដើម្បីបន្សុតចេញពីល្បាយប្រូតេអ៊ីនដែលមានភាពច្របូកច្របល់ជាមួយនឹងភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់។

វិធីសាស្រ្តនេះគឺផ្អែកលើភាពជាក់លាក់ជាជាងការចង covalent នៃប្រូតេអ៊ីនជាក់លាក់ទៅនឹងម៉ូលេគុលមួយទៀតហៅថា ligand (Ligand)។

គោលការណ៍ជាមូលដ្ឋាន៖

ប្រូតេអ៊ីនមាននៅក្នុងល្បាយដែលរញ៉េរញ៉ៃនៅក្នុងជាលិកា ឬកោសិកា ហើយប្រភេទកោសិកានីមួយៗមានប្រូតេអ៊ីនខុសៗគ្នារាប់ពាន់។ ដូច្នេះភាពខុសគ្នារវាងប្រូតេអ៊ីនគឺជាផ្នែកសំខាន់មួយនៃជីវគីមីហើយវាមិនមានតែម្នាក់ឯងទេ។ ឬសំណុំនៃវិធីសាស្រ្តដែលត្រៀមរួចជាស្រេចអាចដកប្រូតេអ៊ីនប្រភេទណាមួយចេញពីប្រូតេអ៊ីនចម្រុះដែលរញ៉េរញ៉ៃ ដូច្នេះវិធីសាស្ត្រជាច្រើនត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ក្នុងការបញ្ចូលគ្នា។