Нуклеин қышқылы дезоксирибонуклеин қышқылына (ДНҚ) және рибонуклеин қышқылына (РНҚ) бөлінеді, олардың арасында РНҚ рибосомалық РНҚ (рРНҚ), хабаршы РНҚ (мРНҚ) және трансферттік РНҚ (тРНҚ) әртүрлі қызметтеріне қарай бөлінуі мүмкін.

ДНҚ негізінен ядрода, митохондрияда және хлоропласттарда шоғырланса, РНҚ негізінен цитоплазмада таралады.

Пуриндік негіздер мен пиримидиндік негіздер нуклеин қышқылдарында конъюгацияланған қос байланыс болғандықтан, нуклеин қышқылдары ультракүлгін сәулелерді сіңіру сипаттамаларына ие. ДНҚ натрий тұздарының ультракүлгін сәулесін сіңіруі 260 нм шамасында және оның сіңіру қабілеті A260 түрінде көрсетіледі және ол 230 нм абсорбциялық шұңқырда болады, сондықтан ультракүлгін спектроскопияны қолдануға болады. Нуклеин қышқылдары сандық және сапалық жағынан люминометр арқылы анықталады.

Нуклеин қышқылдары амфолиттер болып табылады, олар полиқышқылдарға тең. Нуклеин қышқылдарын бейтарап немесе сілтілі буферлерді қолдану арқылы аниондарға диссоциациялауға және анодқа қарай жылжу үшін электр өрісіне орналастыруға болады. Бұл электрофорездің принципі.

Нуклеин қышқылын алу және тазарту принциптері мен талаптары

1. Нуклеин қышқылының біріншілік құрылымының тұтастығын қамтамасыз ету

2. Басқа молекулалардың ластануын жою (мысалы, ДНҚ алу кезінде РНҚ кедергісін болдырмау)

3. Нуклеин қышқылы үлгілерінде ферменттерді тежейтін органикалық еріткіштер мен металл иондарының жоғары концентрациясы болмауы керек.

4. Белоктар, полисахаридтер және липидтер сияқты макромолекулалық заттарды мүмкіндігінше азайтыңыз

Нуклеин қышқылын алу және тазарту әдісі

1. Фенол/хлороформды экстракциялау әдісі

Ол 1956 жылы ойлап табылған. Жасушаның сынған сұйықтығын немесе ұлпа гомогенатын фенол/хлороформмен өңдегеннен кейін нуклеин қышқылының құрамдас бөліктері, негізінен ДНҚ сулы фазада ериді, липидтер негізінен органикалық фазада, ал белоктар екеуінің арасында орналасады. фазалары.

2. Алкогольдің тұнбасы

Этанол нуклеин қышқылының гидратация қабатын жоя алады және теріс зарядталған фосфат тобын ашады, ал NA﹢ сияқты оң зарядталған иондар фосфат тобымен қосылып тұнба түзе алады.

3. Хроматографиялық колонна әдісі

Арнайы кремний диоксиді негізіндегі адсорбциялық материал арқылы ДНҚ арнайы адсорбциялануы мүмкін, ал РНҚ мен ақуыз біркелкі өтіп, нуклеин қышқылын байланыстыру үшін жоғары тұзды және төмен рН қолдана алады, ал нуклеинді бөлу және тазарту үшін төмен тұз және жоғары рН көмегімен элюта алады. қышқыл.

4. Термиялық крекинг сілті әдісі

Сілтілік экстракция негізінен ковалентті тұйықталған дөңгелек плазмидалар мен сызықтық хроматин арасындағы топологиялық айырмашылықтарды оларды бөлу үшін пайдаланады. Сілтілік жағдайда денатуратталған белоктар ериді.

5. Қайнау пиролизі әдісі

ДНҚ ерітіндісі центрифугалау арқылы денатуратталған ақуыздар мен жасуша қалдықтарынан түзілген тұнбадан ДНҚ фрагменттерін бөлу үшін сызықтық ДНҚ молекулаларының қасиеттерін пайдалану үшін термиялық өңдеуден өтеді.

6. Наномагнитті моншақтар әдісі

Нанотехнологияны қолдану арқылы суперпарамагниттік нанобөлшектердің бетін жақсарту және өзгерту үшін суперпарамагниттік кремний оксиді наномагниттік моншақтар дайындалады. Магниттік моншақтар микроскопиялық интерфейсте нуклеин қышқылының молекулаларын арнайы танып, тиімді байланыстыра алады. Кремний тотығы нанофералардың суперпарамагниттік қасиеттерін пайдалана отырып, хаотропты тұздардың (гуанидин гидрохлориді, гуанидин-изотиоцианат және т.б.) және сыртқы магнит өрісінің әсерінен ДНҚ мен РНҚ қаннан, жануарлардың ұлпаларынан, азық-түліктерден, патогендік микроорганизмдерден және басқа үлгілерден бөлініп алынды.