Белоктарды бөлу және тазарту биохимиялық зерттеулер мен қолдануда кеңінен қолданылады және маңызды операциялық дағды болып табылады. Әдеттегі эукариоттық жасушада мыңдаған түрлі белоктар болуы мүмкін, олардың кейбіреулері өте бай, ал кейбіреулерінде тек бірнеше көшірмелер бар. Белгілі бір нәрсені оқу үшінақуыз, алдымен белокты басқа белоктардан және белокты емес молекулалардан тазарту қажет.

1. Тұздау әдісіақуыз:

Бейтарап тұз белоктың ерігіштігіне айтарлықтай әсер етеді. Әдетте, тұздың төмен концентрациясы кезінде тұз концентрациясының жоғарылауымен ақуыздың ерігіштігі жоғарылайды. Бұл тұздау деп аталады; тұз концентрациясы арта бергенде, ақуыздың ерігіштігі әртүрлі дәрежеде төмендейді және бірінен соң бірі бөлінеді. Бұл құбылыс тұздану деп аталады.

2. Изоэлектрлік нүктелерді жинақтау әдісі:

Белок статикалық болғанда бөлшектер арасындағы электростатикалық серпіліс ең аз болады, сондықтан ерігіштік те ең аз болады. Әр түрлі ақуыздардың изоэлектрлік нүктелері әртүрлі. Кондиционер ерітіндісінің рН мәнін ақуыздың изоэлектрлік нүктесіне жету үшін пайдалануға болады, оны жинақтаңыз, бірақ бұл әдіс сирек қолданылады және оны тұздану әдісімен біріктіруге болады.

3. Диализ және ультрафильтрация:

Диализ әртүрлі молекулалық өлшемдегі ақуыздарды бөлу үшін жартылай өткізгіш мембрананы пайдаланады. Ультрафильтрация әдісі жартылай өткізгіш мембрана арқылы суды және басқа да ұсақ еріген заттардың молекулаларын өткізу үшін жоғары қысымды немесе орталықтан тепкіш күшті қолданады.ақуызмембранада қалады. Әртүрлі молекулалық салмақтағы ақуыздарды ұстап тұру үшін әртүрлі кеуек өлшемдерін таңдауға болады.

4.Гельді сүзу әдісі:

Өлшемді алып тастау хроматографиясы немесе молекулалық елеуіш хроматографиясы деп те аталады, бұл ақуыз қоспаларын молекулалық өлшемдерге сәйкес бөлудің ең пайдалы әдістерінің бірі. Колоннада жиі қолданылатын орау материалдары глюкоза гелі (Sephadex ged) және агароз гелі (агароза гелі) болып табылады.

5. Электрофорез:

Бірдей рН жағдайында әртүрлі молекулалық салмақтар мен электр өрісіндегі әртүрлі зарядтарға байланысты әртүрлі ақуыздарды бөлуге болады. Тасымалдаушы ретінде амфолит пайдаланатын изоэлектрлік электрофорезге назар аударған жөн. Электрофорез кезінде амфолит оң электродтан теріс электродқа біртіндеп қосылатын рН градиентін құрайды. Белгілі заряды бар ақуыз оның ішінде жүзгенде, ол бір-біріне жетеді. Электрлік нүктенің рН позициясы үзіліссіз және бұл әдіс әртүрлі ақуыздарды талдау және дайындау үшін пайдаланылуы мүмкін.

6.Иондық байланыс хроматографиясы:

иондық байланыс агенттеріне катиондық байланыс агенттері (мысалы, карбоксиметилцеллюлоза; CM-целлюлоза) және аниондық байланыс агенттері (диэтиламиноэтил целлюлоза) жатады. Иондық байланыс хроматографиясының бағанасы арқылы өткенде иондық байланыс агентіне қарама-қарсы зарядты ақуыз иондық байланыс агентіне адсорбцияланады, содан кейін адсорбцияланады.ақуызрН немесе иондық күшті өзгерту арқылы элюцияланады.

7.Афинділік хроматографиясы:

Афинитті хроматография белоктарды бөлудің өте пайдалы әдісі болып табылады. Белгілі бір протеинді жоғары тазалығы бар ластанған ақуыз қоспасынан бөлу үшін көбінесе бір ғана қадам қажет.

Бұл әдіс белгілі бір белоктардың лиганд (Лиганд) деп аталатын басқа молекуламен ковалентті емес спецификалық байланысуына негізделген.

Негізгі принцип:

белоктар тіндерде немесе жасушаларда ретсіз қоспада болады және жасушаның әрбір түрінде мыңдаған түрлі белоктар болады. Сондықтан белоктар арасындағы айырмашылық биохимияның маңызды бөлігі болып табылады және ол жалғыз болған жоқ. Немесе дайын әдістердің жиынтығы бейберекет аралас ақуыздан кез келген ақуызды алып тастай алады, сондықтан бірнеше әдістер жиі біріктіріліп қолданылады.