ცილების განცალკევება და გაწმენდა ფართოდ გამოიყენება ბიოქიმიის კვლევასა და გამოყენებაში და წარმოადგენს მნიშვნელოვან საოპერაციო უნარს. SCG Protein Purification System Company-Saipu Instrument-მა შეადგინა ნედლი გამოყოფის და წვრილად გამოყოფის შემცველობაცილისგანწმენდა ყველასთვის. ტიპიური ევკარიოტული უჯრედი შეიძლება შეიცავდეს ათასობით სხვადასხვა ცილას, ზოგი ძალიან მდიდარია და ზოგი შეიცავს მხოლოდ რამდენიმე ასლს. გარკვეული ცილის შესასწავლად, ჯერ აუცილებელია ცილის გაწმენდა სხვა ცილებისგან და არაცილოვანი მოლეკულებისგან.

უხეში გამოყოფა

როდესაც ცილოვანი ექსტრაქტი (ზოგჯერ შერეული ნუკლეინის მჟავებით, პოლისაქარიდებით და ა.შ.) მიიღება, შეირჩევა შესაბამისი მეთოდების ნაკრები სასურველის გამოსაყოფად.ცილისსხვა მინარევებისაგან. ზოგადად, განცალკევების ეს ეტაპი იყენებს მეთოდებს, როგორიცაა მარილის გამოყოფა, იზოელექტრული წერტილის დაგროვება და ორგანული გამხსნელების დანაწილება. ეს მეთოდები ხასიათდება სიმარტივით და დიდი დამუშავების უნარით, რომელსაც შეუძლია მრავალი მინარევების მოცილება და ცილის ხსნარის კონცენტრირება. ზოგიერთი ცილის ექსტრაქტი დიდი მოცულობითაა და არ არის შესაფერისი კონცენტრაციისთვის დაგროვების ან მარილის გამოყოფისთვის. თქვენ შეგიძლიათ აირჩიოთ ულტრაფილტრაცია, გელის ფილტრაცია, გაყინვის ვაკუუმური გაშრობა ან კონცენტრაციის სხვა მეთოდები.

ჯარიმა გამოყოფა

ნიმუშის უხეში დანაწილების შემდეგ, მოცულობა ზოგადად მცირეა და მინარევების უმეტესობა ამოღებულია. შემდგომი გაწმენდისთვის, ქრომატოგრაფიის მეთოდები ზოგადად მოიცავს გელის ფილტრაციას, იონგაცვლის ქრომატოგრაფიას, ადსორბციულ ქრომატოგრაფიას და აფინურ ქრომატოგრაფიას. საჭიროების შემთხვევაში, საბოლოო გაწმენდის პროცესად ასევე შეგიძლიათ აირჩიოთ ელექტროფორეზი, მათ შორის ზონის ელექტროფორეზი, იზოელექტრული წერტილოვანი ნაკრები და ა.შ. მეთოდი, რომელიც გამოიყენება ქვედანაყოფების დონის გამოყოფისთვის, ზოგადად მცირეა დაგეგმარებაში, მაგრამ მაღალი გარჩევადობით.

კრისტალიზაცია არის ცილების გამოყოფისა და გაწმენდის საბოლოო პროცესი. მიუხედავად იმისა, რომ კრისტალიზაციის პროცესი არ იძლევა იმის გარანტიას, რომ ცილა უნდა იყოს ერთგვაროვანი, ეს მხოლოდ მაშინ ხდება, როდესაც გარკვეულ პროტეინს აქვს უპირატესობა ხსნარში კრისტალის შესაქმნელად. თავად კრისტალიზაციის პროცესს თან ახლავს გაწმენდის გარკვეული ხარისხი, ხოლო რეკრისტალიზაციას შეუძლია მცირე რაოდენობით ფალსიფიცირებული ცილის ამოღება. მას შემდეგ, რაც დენატურირებულიცილისარასოდეს იქნა ნაპოვნი კრისტალიზაციის პროცესში, ცილის კრისტალიზაცია არა მხოლოდ სიწმინდის ნიშანია, არამედ ძლიერი სახელმძღვანელოა იმის დასადგენად, რომ პროდუქტი ბუნებრივ მდგომარეობაშია.