ცილების განცალკევება და გაწმენდა ფართოდ გამოიყენება ბიოქიმიის კვლევასა და გამოყენებაში და წარმოადგენს მნიშვნელოვან საოპერაციო უნარს. ტიპიური ევკარიოტული უჯრედი შეიძლება შეიცავდეს ათასობით სხვადასხვა ცილას, ზოგი ძალიან მდიდარია და ზოგი შეიცავს მხოლოდ რამდენიმე ასლს. იმისათვის, რომ შეისწავლოს გარკვეულიცილისაუცილებელია ცილის გაწმენდა სხვა ცილებისგან და არაცილოვანი მოლეკულებისგან.

1. Salting-out მეთოდიცილის:

ნეიტრალურ მარილს მნიშვნელოვანი გავლენა აქვს ცილის ხსნადობაზე. ზოგადად, მარილის დაბალი კონცენტრაციის მატებასთან ერთად, ცილის ხსნადობა იზრდება. ამას ჰქვია დამარილება; როდესაც მარილის კონცენტრაცია კვლავ იზრდება, ცილის ხსნადობა მცირდება სხვადასხვა ხარისხით და ერთმანეთის მიყოლებით გამოიყოფა. ამ ფენომენს მარილის ამოღება ეწოდება.

2. იზოელექტრული წერტილის დაწყობის მეთოდი:

ნაწილაკებს შორის ელექტროსტატიკური მოგერიება ყველაზე მცირეა, როდესაც ცილა სტატიკურია, ამიტომ ხსნადობაც ყველაზე მცირეა. სხვადასხვა ცილების იზოელექტრული წერტილები განსხვავებულია. კონდიცირების ხსნარის pH შეიძლება გამოყენებულ იქნას ცილის იზოელექტრული წერტილის მისაღწევად, რათა მოხდეს მისი დაგროვება, მაგრამ ეს მეთოდი იშვიათად გამოიყენება ცალკე და შეიძლება გაერთიანდეს მარილის ამოღების მეთოდთან.

3.დიალიზი და ულტრაფილტრაცია:

დიალიზი იყენებს ნახევრად გამტარ მემბრანას სხვადასხვა მოლეკულური ზომის ცილების გამოსაყოფად. ულტრაფილტრაციის მეთოდი იყენებს მაღალ წნევას ან ცენტრიდანულ ძალას, რათა წყალი და სხვა მცირე გამხსნელი მოლეკულები გაიარონ ნახევრად გამტარ მემბრანაში, ხოლოცილისრჩება მემბრანაზე. თქვენ შეგიძლიათ აირჩიოთ სხვადასხვა ზომის ფორები სხვადასხვა მოლეკულური წონის პროტეინებისთვის.

4.გელის ფილტრაციის მეთოდი:

მას ასევე უწოდებენ ზომის გამორიცხვის ქრომატოგრაფიას ან მოლეკულური საცრის ქრომატოგრაფიას, ეს არის ერთ-ერთი ყველაზე სასარგებლო მეთოდი ცილოვანი ნარევების გამოყოფისთვის მოლეკულური ზომის მიხედვით. სვეტში უფრო ხშირად გამოყენებული შესაფუთი მასალებია გლუკოზის გელი (Sephadex ged) და აგაროზის გელი (აგაროზის გელი).

5. ელექტროფორეზი:

იგივე pH პირობებში, სხვადასხვა ცილები შეიძლება განცალკევდეს მათი განსხვავებული მოლეკულური წონისა და ელექტრულ ველში განსხვავებული მუხტის გამო. ღირს ყურადღება მიაქციოთ იზოელექტრული კომპლექტის ელექტროფორეზს, რომელიც იყენებს ამფოლიტს, როგორც მატარებელს. ელექტროფორეზის დროს ამფოლიტი აყალიბებს pH გრადიენტს, რომელიც თანდათან ემატება დადებითი ელექტროდიდან უარყოფით ელექტროდს. როცა მასში გარკვეული მუხტის მქონე ცილა ცურავს, ის ერთმანეთს მიაღწევს. ელექტრული წერტილის pH პოზიცია წყვეტილია და ამ მეთოდის გამოყენება შესაძლებელია სხვადასხვა ცილების ანალიზისა და მოსამზადებლად.

6.იონური საკომუნიკაციო ქრომატოგრაფია:

იონური საკომუნიკაციო აგენტები მოიცავს კათიონურ საკომუნიკაციო აგენტებს (როგორიცაა კარბოქსიმეთილ ცელულოზა; CM-ცელულოზა) და ანიონური საკომუნიკაციო აგენტები (დიეთილამინეთილის ცელულოზა). იონური საკომუნიკაციო ქრომატოგრაფიის სვეტში გავლისას, იონური საკომუნიკაციო აგენტის საწინააღმდეგო მუხტის მქონე ცილა ადსორბირდება იონური საკომუნიკაციო აგენტზე, შემდეგ კი ადსორბირდება.ცილისგამოიყოფა pH ან იონური სიძლიერის შეცვლით.

7. აფინური ქრომატოგრაფია:

აფინური ქრომატოგრაფია უკიდურესად სასარგებლო მეთოდია ცილების გამოყოფისთვის. ხშირად საჭიროა მხოლოდ ერთი ნაბიჯი გარკვეული პროტეინის გამოსაყოფად, რათა გაიწმინდოს ბინძური ცილის ნარევიდან მაღალი სისუფთავით.

ეს მეთოდი ეფუძნება გარკვეული ცილების სპეციფიკურ და არა კოვალენტურ შეკავშირებას სხვა მოლეკულასთან, რომელსაც ლიგანდს უწოდებენ (ლიგანდი).

ძირითადი პრინციპი:

ცილები არსებობს ბინძურ ნარევში ქსოვილებში ან უჯრედებში და თითოეული ტიპის უჯრედი შეიცავს ათასობით სხვადასხვა ცილას. ამრიგად, ცილებს შორის განსხვავება ბიოქიმიის მნიშვნელოვანი ნაწილია და ის მარტო არ ყოფილა. ან მზა მეთოდების ერთობლიობამ შეიძლება ამოიღოს ნებისმიერი სახის ცილა ბინძური შერეული ცილისგან, ამიტომ რამდენიმე მეთოდი ხშირად გამოიყენება კომბინაციაში.