Aðferðir og hreinsun próteinhreinsunar

Aðferðir viðpróteinhreinsun:

Aðferðin við próteinhreinsun, aðskilnað og hreinsun próteina, próteinið er losað úr upprunalegum frumum eða vefjum í uppleystu ástandi og helst í upprunalegu náttúrulegu ástandi án þess að missa líffræðilega virkni. Af þessum sökum ætti efnið að fjarlægja dýra- og fituvef, fræefnið ætti jafnvel að fjarlægja mengun fræhjúpsins af efnum eins og tannínum og olíufræ ætti helst að nota lágsjóðandi lífrænan leysi.

1. Aðferðin við próteinhreinsun, stærð og mismunandi aðskilnaðargreiningaraðferðir: skilun og ofsíun nota þessi prótein til að fara í gegnum eðli sameinda sem geta ekki farið í gegnum hálfgegndræpa himnuna; þéttleikastigsskilvindun Gæði og þéttleiki próteinsins í miðlinum mun hafa meiri áhrif á agnir. Stillingarhraði er hraðari; hlaupsíun er eins konar súluskiljun.

2. Aðskilnaður leysnimismunur í notkun: rafútfelling vegna þess að nettóhleðsla próteinsameinda er við núll jafnrafmagnspunkt, sem dregur úr rafstöðueiginleika fráhrindingu milli sameinda, auðvelt að safna saman og lágmarksleysni; saltlausn notuð með saltlausn Styrkurinn eykur eða minnkar leysni próteinsins.

3. Hleðslan er aðskilin og greind með mismunandi aðferðum, aðalinnihaldið er rafdráttur og jónaskiptaskiljun.

4. Aðferðir viðpróteinhreinsunSértækt aðsog og aðskilnaður próteina nýtir styrkleika aðsogs agna.

5. Sækniskiljun byggir á aðskilnaði bindla. Þessi líffræðilegi eiginleiki gerir próteinsameindum kleift að bindast sérstaklega frekar en samgilt við aðra sameind sem kallast bindill.

6. Aðferð við próteinhreinsun: Lághitaúrfellingaraðferð með lífrænum leysiefnum: Notaðu lífræn leysiefni sem eru blandanleg með vatni, eins og metanól, etanól, til að draga úr leysni og útfellingu flestra próteina. Þessi aðferð er hærri en upplausnin að salta út, en próteinið denatures meira Þegar auðvelt er, ætti það að vera gert við lágan hita.

6ca4b93f5

Hvernig á að hreinsapróteinhreinsun:

Hvernig á að hreinsa prótein, prótein er stór sameind, og ýmsar sameindastærðir albúmíns, það eru nokkrar einfaldari aðferðir til að aðskilja prótein og lítil sameindaefni, og einnig aðskilin próteinblöndu. Helstu aðferðir til að aðskilja prótein af mismunandi sameindastærðum eru skilun, ofursíun, hlaupsíun og miðflóttaaðskilnaður. Skilun og ofsíun eru almennt notuð í próteinaðskilnaðaraðferðum. Skilunarblandan sem á að aðskilja er sett í skilunarpoka úr hálfgegndræpri himnu og síðan sökkt í skilunarlausnina til aðskilnaðar. Ofsíun er ferlið við að flytja vatn og aðrar litlar sameindir með miðflóttakrafti eða þrýstingi í hálfgegndræpi himnu og fanga prótein í hálfgegndræpi himnunni. Þessar tvær aðferðir er hægt að aðskilja frá prótein-undirstaða stórsameindum og ólífrænum salt-undirstaða litla sameindir. Þeir eru oft söltaðir út, notaðir í tengslum við saltupplausnaraðferðina, eða hægt er að kynna þær til að taka út þessar tvær aðferðir eftir útsöltun með ólífrænum saltlausnum.

1. Hvernig á að hreinsa prótein með söltunaraðferð: Grundvöllur söltunaraðferðarinnar er að leysni próteins í þynntri saltlausn eykst með aukningu saltstyrks, en þegar saltstyrkurinn hækkar í ákveðið gildi vatnsvirkni verði aukin. Minnkun, sem aftur getur valdið því að sum prótein mynda hleðslur í gegnum yfirborð sameindabyggingarinnar, verða smám saman hlutlaus, og vökvunarhimnan eyðileggst smám saman, sem getur að lokum valdið því að skyld prótein og sameindir mynda þéttingu og botnfall úr mismunandi lausnum.

2. Útfellingaraðferð lífrænna leysiefna: Það eru tvær ástæður til að draga úr leysni próteins í lífrænum leysum: hvernig á að hreinsa prótein sem saltlausn með ofþornun; í öðru lagi er hægt að minnka rafstuðul lífrænna leysiefna en vatns í skautuðum leysum.

3. Próteinútfellingarefni: prótein sem útfellingarefni virkar aðeins á eina tegund eða eina af próteinútfellingu, algengar eru basískt, prótein, lektín og þungmálmar.

4. Pólýetýlen glýkól útfelling: Hvernig á að hreinsa vatnsleysanlegar ójónaðar fjölliður fyrirpróteinhreinsun, eins og pólýetýlen glýkól og natríumdextran súlfat til að fella út prótein.


Birtingartími: 27. október 2020