Pemisahan dan pemurnian protein banyak digunakan dalam penelitian dan penerapan biokimia dan merupakan keterampilan operasional yang penting. Sel eukariotik yang khas dapat mengandung ribuan protein berbeda, ada yang sangat kaya dan ada yang hanya berisi sedikit salinan. Untuk mempelajari tertentuprotein, protein perlu dimurnikan terlebih dahulu dari protein lain dan molekul non-protein.

1. Metode pengasinanprotein:

Garam netral mempunyai pengaruh yang signifikan terhadap kelarutan protein. Umumnya, dengan meningkatnya konsentrasi garam pada konsentrasi garam rendah, kelarutan protein meningkat. Ini disebut pengasinan; ketika konsentrasi garam terus meningkat, kelarutan protein menurun hingga tingkat yang berbeda-beda dan terpisah satu demi satu. Fenomena ini disebut salting out.

2. Metode penumpukan titik isoelektrik:

Tolakan elektrostatis antar partikel paling kecil pada saat protein diam, sehingga kelarutannya juga paling kecil. Titik isoelektrik berbagai protein berbeda-beda. PH larutan pengkondisi dapat digunakan untuk mencapai titik isoelektrik suatu protein dan membuatnya terakumulasi, namun metode ini jarang digunakan sendiri dan dapat dikombinasikan dengan metode salting-out.

3.Dialisis dan ultrafiltrasi:

Dialisis menggunakan membran semipermeabel untuk memisahkan protein dengan ukuran molekul berbeda. Metode ultrafiltrasi menggunakan tekanan tinggi atau gaya sentrifugal untuk membuat air dan molekul zat terlarut kecil lainnya melewati membran semi-permeabel, sedangkanproteintetap berada pada membran. Anda dapat memilih ukuran pori yang berbeda untuk mencegat protein dengan berat molekul berbeda.

4. Metode penyaringan gel:

Juga disebut kromatografi eksklusi ukuran atau kromatografi saringan molekuler, ini adalah salah satu metode yang paling berguna untuk memisahkan campuran protein menurut ukuran molekul. Bahan pengemas yang lebih umum digunakan dalam kolom adalah gel glukosa (Sephadex ged) dan gel agarosa (agarose gel).

5.Elektroforesis:

Di bawah kondisi pH yang sama, berbagai protein dapat dipisahkan karena perbedaan berat molekul dan muatan medan listrik yang berbeda. Perlu memperhatikan elektroforesis set isoelektrik, yang menggunakan amfolit sebagai pembawa. Selama elektroforesis, amfolit membentuk gradien pH yang ditambahkan secara bertahap dari elektroda positif ke elektroda negatif. Ketika protein dengan muatan tertentu berenang di dalamnya, maka akan mencapai satu sama lain. Posisi pH titik listrik terputus-putus, dan metode ini dapat digunakan untuk menganalisis dan menyiapkan berbagai protein.

6. Kromatografi komunikasi ion:

agen komunikasi ion termasuk agen komunikasi kationik (seperti karboksimetil selulosa; CM-selulosa) dan agen komunikasi anionik (dietilaminoetil selulosa). Ketika melewati kolom kromatografi komunikasi ion, protein dengan muatan yang berlawanan dengan agen komunikasi ion teradsorpsi pada agen komunikasi ion, dan kemudian teradsorpsi.proteindielusi dengan mengubah pH atau kekuatan ionik.

7. Kromatografi afinitas:

Kromatografi afinitas adalah metode yang sangat berguna untuk memisahkan protein. Seringkali hanya diperlukan satu langkah untuk memisahkan protein tertentu untuk dimurnikan dari campuran protein berantakan dengan kemurnian tinggi.

Metode ini didasarkan pada pengikatan protein tertentu secara spesifik dan bukan kovalen dengan molekul lain yang disebut ligan (Ligan).

Prinsip dasarnya:

Protein ada dalam campuran yang berantakan di jaringan atau sel, dan setiap jenis sel mengandung ribuan protein berbeda. Oleh karena itu, pembedaan antara protein merupakan bagian penting dari biokimia, dan hal ini tidak sendirian. Atau serangkaian metode siap pakai dapat menghilangkan segala jenis protein dari campuran protein yang berantakan, sehingga beberapa metode sering kali digunakan secara bersamaan.