Սպիտակուցների տարանջատումը և մաքրումը լայնորեն օգտագործվում է կենսաքիմիայի հետազոտության և կիրառման մեջ և հանդիսանում է կարևոր գործառնական հմտություն: Տիպիկ էուկարիոտ բջիջը կարող է պարունակել հազարավոր տարբեր սպիտակուցներ, որոնցից ոմանք շատ հարուստ են, իսկ ոմանք պարունակում են ընդամենը մի քանի օրինակ: Որպեսզի ուսումնասիրեն որոշակիսպիտակուցը, անհրաժեշտ է նախ սպիտակուցը մաքրել այլ սպիտակուցներից և ոչ սպիտակուցային մոլեկուլներից։

1. Salting-out մեթոդըսպիտակուցը:

Չեզոք աղը զգալի ազդեցություն ունի սպիտակուցի լուծելիության վրա։ Ընդհանրապես, աղի ցածր կոնցենտրացիայի դեպքում աղի կոնցենտրացիայի բարձրացմամբ, սպիտակուցի լուծելիությունը մեծանում է: Սա կոչվում է աղակալում; երբ աղի կոնցենտրացիան շարունակում է աճել, սպիտակուցի լուծելիությունը նվազում է տարբեր աստիճաններով և բաժանվում մեկը մյուսի հետևից: Այս երեւույթը կոչվում է աղակալում:

2. Իզոէլեկտրական կետի կուտակման մեթոդ.

Մասնիկների միջև էլեկտրաստատիկ վանումն ամենափոքրն է, երբ սպիտակուցը ստատիկ է, ուստի լուծելիությունը նույնպես ամենափոքրն է։ Տարբեր սպիտակուցների իզոէլեկտրական կետերը տարբեր են։ Կոնդիցիոներ լուծույթի pH-ը կարող է օգտագործվել սպիտակուցի իզոէլեկտրական կետին հասնելու համար, որպեսզի այն կուտակվի, սակայն այս մեթոդը հազվադեպ է օգտագործվում միայնակ և կարող է զուգակցվել աղակալման մեթոդի հետ:

3. Դիալիզ և ուլտրաֆիլտրացիա.

Դիալիզի միջոցով օգտագործվում է կիսաթափանցիկ թաղանթ՝ տարբեր մոլեկուլային չափերի սպիտակուցներ առանձնացնելու համար: Ուլտրաֆիլտրման մեթոդը օգտագործում է բարձր ճնշում կամ կենտրոնախույս ուժ, որպեսզի ջուրը և լուծված այլ փոքր մոլեկուլները անցնեն կիսաթափանցիկ թաղանթով, մինչդեռսպիտակուցըմնում է թաղանթի վրա: Դուք կարող եք ընտրել տարբեր ծակոտիների չափսեր՝ տարբեր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցներ հայտնաբերելու համար:

4. Գել ֆիլտրման մեթոդ:

Նաև կոչվում է չափի բացառման քրոմատոգրաֆիա կամ մոլեկուլային մաղի քրոմատոգրաֆիա, սա սպիտակուցային խառնուրդներն ըստ մոլեկուլային չափի առանձնացնելու ամենաօգտակար մեթոդներից մեկն է։ Սյունակում առավել հաճախ օգտագործվող փաթեթավորման նյութերն են գլյուկոզայի գելը (Sephadex ged) և ագարոզայի գելը (ագարոզա գել):

5.Էլեկտրոֆորեզ.

Նույն pH-ի պայմաններում տարբեր սպիտակուցներ կարող են առանձնացվել իրենց տարբեր մոլեկուլային քաշի և էլեկտրական դաշտում տարբեր լիցքերի պատճառով: Արժե ուշադրություն դարձնել isoelectric set էլեկտրոֆորեզին, որն օգտագործում է ամֆոլիտ որպես կրող: Էլեկտրոֆորեզի ժամանակ ամֆոլիտը ձևավորում է pH գրադիենտ, որն աստիճանաբար ավելացվում է դրական էլեկտրոդից դեպի բացասական էլեկտրոդ: Երբ որոշակի լիցք ունեցող սպիտակուցը լողում է դրա մեջ, այն կհասնի միմյանց։ Էլեկտրական կետի pH դիրքը դադարում է, և այս մեթոդը կարող է օգտագործվել տարբեր սպիտակուցներ վերլուծելու և պատրաստելու համար:

6.Ion կապի քրոմատոգրաֆիա:

Իոնային հաղորդակցման միջոցները ներառում են կատիոնային հաղորդակցման նյութեր (օրինակ՝ կարբոքսիմեթիլ ցելյուլոզա, CM-ցելյուլոզա) և անիոնային հաղորդակցման նյութեր (դիէթիլամինոէթիլ ցելյուլոզա): Իոնային հաղորդակցության քրոմատոգրաֆիայի սյունակով անցնելիս իոնային հաղորդակցման գործակալին հակառակ լիցք ունեցող սպիտակուցը ներծծվում է իոնային հաղորդակցման գործակալի վրա, այնուհետև ներծծվում է.սպիտակուցըզտվում է pH-ի կամ իոնային ուժի փոփոխությամբ:

7. Affinity chromatography:

Հարաբերական քրոմատոգրաֆիան չափազանց օգտակար մեթոդ է սպիտակուցների տարանջատման համար: Հաճախ միայն մեկ քայլ է պահանջվում որոշակի սպիտակուցը մաքրելու համար բարձր մաքրությամբ խառնաշփոթ սպիտակուցային խառնուրդից առանձնացնելու համար:

Այս մեթոդը հիմնված է որոշակի սպիտակուցների, այլ ոչ թե կովալենտային կապի վրա, այլ մոլեկուլի, որը կոչվում է լիգանդ (Լիգանդ):

Հիմնական սկզբունքը.

սպիտակուցները գոյություն ունեն հյուսվածքներում կամ բջիջներում խառնաշփոթ խառնուրդով, և բջիջների յուրաքանչյուր տեսակ պարունակում է հազարավոր տարբեր սպիտակուցներ: Հետևաբար, սպիտակուցների միջև տարբերությունը կենսաքիմիայի կարևոր մասն է, և դա միայնակ չի եղել: Կամ մի շարք պատրաստի մեթոդներ կարող են հեռացնել ցանկացած տեսակի սպիտակուցը խառնաշփոթ սպիտակուցից, ուստի մի քանի մեթոդներ հաճախ օգտագործվում են համակցված: