A nukleinsavat dezoxiribonukleinsavra (DNS) és ribonukleinsavra (RNS) osztják, amelyek közül az RNS riboszomális RNS-re (rRNS), hírvivő RNS-re (mRNS) és transzfer RNS-re (tRNS) osztható fel különböző funkciók szerint.

A DNS főként a sejtmagban, a mitokondriumokban és a kloroplasztiszokban koncentrálódik, míg az RNS főként a citoplazmában oszlik el.

Mivel a purinbázisok és a pirimidinbázisok konjugált kettős kötéseket tartalmaznak a nukleinsavakban, a nukleinsavak ultraibolya-abszorpciós jellemzőkkel rendelkeznek. A DNS-nátriumsók ultraibolya abszorpciója 260 nm körüli, abszorbanciáját A260-ban fejezzük ki, 230 nm-en pedig az abszorpciós mélypontnál van, így ultraibolya spektroszkópia használható. A nukleinsavakat mennyiségileg és minőségileg luminométer határozza meg.

A nukleinsavak amfolitok, amelyek egyenértékűek a polisavakkal. A nukleinsavak semleges vagy lúgos pufferek segítségével anionokká disszociálhatók, és elektromos mezőbe helyezve az anód felé mozognak. Ez az elektroforézis elve.

Nukleinsav-kivonási és tisztítási elvek és követelmények

1. Biztosítsa a nukleinsav elsődleges szerkezetének integritását

2. Szüntesse meg az egyéb molekulák szennyeződését (például az RNS-interferenciának kizárása a DNS kivonásakor)

3. A nukleinsavmintákban nem lehetnek szerves oldószerek és nagy koncentrációjú fémionok, amelyek gátolják az enzimeket

4. Csökkentse a makromolekuláris anyagokat, például a fehérjéket, poliszacharidokat és lipideket, amennyire csak lehetséges

Nukleinsav extrakciós és tisztítási módszer

1. Fenol/kloroform extrakciós módszer

1956-ban találták fel. A sejttört folyadék vagy szövethomogenizátum fenollal/kloroformmal történő kezelését követően a nukleinsav komponensek, főleg a DNS feloldódnak a vizes fázisban, a lipidek főleg a szerves fázisban, a fehérjék pedig a kettő között helyezkednek el. fázisok.

2. Alkoholos csapadék

Az etanol eltávolíthatja a nukleinsav hidratációs rétegét, és szabaddá teheti a negatív töltésű foszfátcsoportot, a pozitív töltésű ionok, például a NA﹢ pedig a foszfátcsoporttal egyesülve csapadékot képezhetnek.

3. Kromatográfiás oszlopos módszer

A speciális szilícium-dioxid alapú adszorpciós anyagon keresztül a DNS specifikusan adszorbeálható, míg az RNS és a fehérje zökkenőmentesen átjuthat, majd magas sót és alacsony pH-t használ a nukleinsav megkötésére, majd alacsony sóval és magas pH-val eluálva a nukleinsav elválasztására és tisztítására. sav.

4. Termikus krakkolás lúgos módszer

A lúgos extrakció főként a kovalensen zárt cirkuláris plazmidok és a lineáris kromatin közötti topológiai különbségeket használja szétválasztásukra. Lúgos körülmények között a denaturált fehérjék oldódnak.

5. Forralásos pirolízis módszer

A DNS-oldatot hőkezelésnek vetik alá, hogy kihasználják a lineáris DNS-molekulák tulajdonságait, így centrifugálással elválasztják a DNS-fragmenseket a denaturált fehérjék és sejttörmelékek által képződött csapadéktól.

6. Nanomágneses gyöngyök módszere

Nanotechnológia felhasználásával szuperparamágneses nanorészecskék felületének javítására és módosítására szuperparamágneses szilícium-oxid nanomágneses gyöngyöket készítenek. A mágneses gyöngyök specifikusan képesek felismerni és hatékonyan kötődni a nukleinsavmolekulákhoz egy mikroszkopikus felületen. A szilícium-dioxid nanogömbök szuperparamágneses tulajdonságait felhasználva kaotróp sók (guanidin-hidroklorid, guanidin-izotiocianát stb.) és külső mágneses tér hatására DNS-t és RNS-t izoláltak vérből, állati szövetekből, élelmiszerekből, patogén mikroorganizmusokból és egyéb mintákból.