Separasyon an ak pirifikasyon nan pwoteyin lajman ki itilize nan rechèch byochimik ak aplikasyon epi li se yon konpetans operasyonèl enpòtan. Yon selil ekaryotik tipik ka gen plizyè milye pwoteyin diferan, gen kèk ki trè rich ak kèk gen sèlman kèk kopi. Yo nan lòd yo etidye yon sètenpwoteyin, li nesesè premye pirifye pwoteyin ki soti nan lòt pwoteyin ak molekil ki pa pwoteyin.

1. Saling-out metòd depwoteyin:

Sèl net gen yon efè enpòtan sou solubility nan pwoteyin. Anjeneral, ak ogmantasyon nan konsantrasyon sèl anba konsantrasyon sèl ki ba, solubilite nan pwoteyin ogmante. Yo rele sa sale; lè konsantrasyon sèl la kontinye ogmante, Solibilite nan pwoteyin diminye nan diferan degre ak separe soti youn apre lòt. Fenomèn sa a rele saling out.

2. Isoelectric pwen anpile metòd:

Repouse elektwostatik ant patikil se pi piti a lè pwoteyin nan estatik, kidonk solubilite a se tou pi piti a. Pwen izoelektrik divès pwoteyin yo diferan. Yo ka itilize pH solisyon kondisyone a pou rive nan pwen izoelektrik yon pwoteyin. Fè li akimile, men metòd sa a se raman itilize poukont li epi li ka konbine avèk metòd saling-out la.

3.Dyaliz ak ultrafiltrasyon:

Dyaliz itilize yon manbràn semi-pèmeyab pou separe pwoteyin ki gen diferan gwosè molekilè. Metòd ultrafiltrasyon an sèvi ak gwo presyon oswa fòs santrifujeur pou fè dlo ak lòt molekil solut ti pase nan yon manbràn semi-pèmeyab, pandan y ap la.pwoteyinrete sou manbràn la. Ou ka chwazi gwosè pò diferan pou entèsepte pwoteyin ki gen diferan pwa molekilè.

4.Gel filtraj metòd:

Yo rele tou chromatografi esklizyon gwosè oswa kromatografi Van molekilè, sa a se youn nan metòd ki pi itil pou separe melanj pwoteyin dapre gwosè molekilè. Materyèl anbalaj ki pi souvan itilize nan kolòn nan se jèl glikoz (Sephadex ged) ak jèl agarose (jèl agarose).

5.Electrophoresis:

Anba menm kondisyon pH la, divès kalite pwoteyin ka separe akòz diferan pwa molekilè yo ak chaj diferan nan jaden elektrik la. Li vo peye atansyon sou elektwoforèz seri izoelektrik, ki sèvi ak yon amfolit kòm yon konpayi asirans. Pandan elektwoforèz, amfolit la fòme yon gradyan pH piti piti ajoute soti nan elektwòd pozitif la nan elektwòd negatif la. Lè pwoteyin nan ak yon chaj sèten naje nan li, li pral rive youn ak lòt. Pozisyon pH pwen elektrik la se discontinuous, epi metòd sa a ka itilize pou analize ak prepare divès kalite pwoteyin.

6.Ion kominikasyon kwomatografi:

ajan kominikasyon iyon yo enkli ajan kominikasyon kasyonik (tankou karboksimetil seluloz; CM-seluloz) ak ajan kominikasyon anyonik (diethylaminoethyl cellulose). Lè w ap pase nan kolòn chromatografi kominikasyon ion, pwoteyin ki gen chaj opoze ak ajan kominikasyon ion adsorbed sou ajan kominikasyon ion, epi li adsorbe.pwoteyineliye pa chanje pH la oswa fòs iyonik.

7.Kwomatografi afinite:

Kwomatografi afinite se yon metòd trè itil pou separe pwoteyin yo. Li souvan mande pou yon sèl etap separe yon sèten pwoteyin yo dwe pirifye soti nan yon melanj pwoteyin sal ak pite segondè.

Metòd sa a baze sou espesifik olye ke kovalan obligatwa nan sèten pwoteyin nan yon lòt molekil yo rele yon ligand (Ligand).

Prensip debaz la:

pwoteyin egziste nan yon melanj sal nan tisi oswa selil, epi chak kalite selil gen plizyè milye pwoteyin diferan. Se poutèt sa, distenksyon ki genyen ant pwoteyin se yon pati enpòtan nan byochimik, epi li pa te poukont li. Oswa yon seri metòd pare yo ka retire nenpòt kalite pwoteyin nan yon pwoteyin melanje sal, kidonk plizyè metòd yo souvan itilize nan konbinezon.