न्यूक्लिक एसिड को डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड (डीएनए) और राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) में विभाजित किया जाता है, जिनमें से आरएनए को विभिन्न कार्यों के अनुसार राइबोसोमल आरएनए (आरआरएनए), मैसेंजर आरएनए (एमआरएनए) और ट्रांसफर आरएनए (टीआरएनए) में विभाजित किया जा सकता है।

डीएनए मुख्य रूप से नाभिक, माइटोकॉन्ड्रिया और क्लोरोप्लास्ट में केंद्रित होता है, जबकि आरएनए मुख्य रूप से साइटोप्लाज्म में वितरित होता है।

क्योंकि प्यूरीन बेस और पाइरीमिडीन बेस में न्यूक्लिक एसिड में संयुग्मित दोहरे बंधन होते हैं, न्यूक्लिक एसिड में पराबैंगनी अवशोषण की विशेषताएं होती हैं। डीएनए सोडियम लवण का पराबैंगनी अवशोषण लगभग 260nm है, और इसका अवशोषण A260 के रूप में व्यक्त किया गया है, और यह 230nm पर अवशोषण गर्त पर है, इसलिए पराबैंगनी स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग किया जा सकता है। न्यूक्लिक एसिड मात्रात्मक और गुणात्मक रूप से एक ल्यूमिनोमीटर द्वारा निर्धारित होते हैं।

न्यूक्लिक एसिड एम्फोलाइट्स हैं, जो पॉलीएसिड के बराबर हैं। तटस्थ या क्षारीय बफ़र्स का उपयोग करके न्यूक्लिक एसिड को आयनों में अलग किया जा सकता है, और एनोड की ओर बढ़ने के लिए विद्युत क्षेत्र में रखा जा सकता है। यह वैद्युतकणसंचलन का सिद्धांत है।

न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण सिद्धांत और आवश्यकताएं

1. न्यूक्लिक एसिड प्राथमिक संरचना की अखंडता सुनिश्चित करें

2. अन्य अणुओं के संदूषण को खत्म करें (जैसे डीएनए निकालते समय आरएनए हस्तक्षेप को बाहर करना)

3. न्यूक्लिक एसिड नमूनों में कोई कार्बनिक विलायक और धातु आयनों की उच्च सांद्रता नहीं होनी चाहिए जो एंजाइमों को रोकती हैं

4. जितना संभव हो प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड और लिपिड जैसे मैक्रोमोलेक्यूलर पदार्थों को कम करें

न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण विधि

1. फिनोल/क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि

इसका आविष्कार 1956 में किया गया था। कोशिका के टूटे हुए तरल या ऊतक समरूप को फिनोल/क्लोरोफॉर्म से उपचारित करने के बाद, न्यूक्लिक एसिड घटक, मुख्य रूप से डीएनए, जलीय चरण में घुल जाते हैं, लिपिड मुख्य रूप से कार्बनिक चरण में होते हैं, और प्रोटीन दोनों के बीच स्थित होते हैं चरण.

2. शराब अवक्षेपण

इथेनॉल न्यूक्लिक एसिड की जलयोजन परत को खत्म कर सकता है और नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए फॉस्फेट समूह को उजागर कर सकता है, और NA﹢ जैसे सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए आयन फॉस्फेट समूह के साथ मिलकर एक अवक्षेप बना सकते हैं।

3. क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम विधि

विशेष सिलिका-आधारित सोखने वाली सामग्री के माध्यम से, डीएनए को विशेष रूप से सोख लिया जा सकता है, जबकि आरएनए और प्रोटीन आसानी से गुजर सकते हैं, और फिर न्यूक्लिक एसिड को बांधने के लिए उच्च नमक और कम पीएच का उपयोग करते हैं, और न्यूक्लिक एसिड को अलग करने और शुद्ध करने के लिए कम नमक और उच्च पीएच का उपयोग करते हैं। अम्ल.

4. थर्मल क्रैकिंग क्षार विधि

क्षारीय निष्कर्षण मुख्य रूप से उन्हें अलग करने के लिए सहसंयोजक रूप से बंद गोलाकार प्लास्मिड और रैखिक क्रोमैटिन के बीच टोपोलॉजिकल अंतर का उपयोग करता है। क्षारीय परिस्थितियों में, विकृत प्रोटीन घुलनशील होते हैं।

5. उबालने की पायरोलिसिस विधि

अपकेंद्रित्र द्वारा विकृत प्रोटीन और सेलुलर मलबे द्वारा गठित अवक्षेप से डीएनए टुकड़ों को अलग करने के लिए रैखिक डीएनए अणुओं के गुणों का लाभ उठाने के लिए डीएनए समाधान को गर्मी से उपचारित किया जाता है।

6. नैनोमैग्नेटिक मोती विधि

सुपरपैरामैग्नेटिक नैनोकणों की सतह को सुधारने और संशोधित करने के लिए नैनोटेक्नोलॉजी का उपयोग करके, सुपरपैरामैग्नेटिक सिलिकॉन ऑक्साइड नैनो-मैग्नेटिक मोती तैयार किए जाते हैं। चुंबकीय मोती सूक्ष्म इंटरफ़ेस पर न्यूक्लिक एसिड अणुओं को विशेष रूप से पहचान सकते हैं और कुशलतापूर्वक बांध सकते हैं। सिलिका नैनोस्फेयर के सुपरपैरामैग्नेटिक गुणों का उपयोग करते हुए, कैओट्रोपिक लवण (गुआनिडीन हाइड्रोक्लोराइड, गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट, आदि) और एक बाहरी चुंबकीय क्षेत्र की कार्रवाई के तहत, डीएनए और आरएनए को रक्त, पशु ऊतक, भोजन, रोगजनक सूक्ष्मजीवों और अन्य नमूनों से अलग किया गया था।