के तरीकेप्रोटीन शुद्धि:

प्रोटीन शुद्धिकरण, पृथक्करण और शुद्धिकरण की विधि, प्रोटीन को मूल कोशिकाओं या ऊतकों से विघटित अवस्था में छोड़ा जाता है और जैविक गतिविधि के नुकसान के बिना मूल प्राकृतिक अवस्था में रहता है। इस कारण से, सामग्री को पशु और वसा ऊतक को हटा देना चाहिए, बीज सामग्री को टैनिन जैसे पदार्थों से बीज कोट के प्रदूषण को भी दूर करना चाहिए, और तेल बीज को अधिमानतः कम उबलते कार्बनिक विलायक का उपयोग करना चाहिए।

1. प्रोटीन शुद्धिकरण की विधि, आकार और विभिन्न पृथक्करण विश्लेषण विधियां: डायलिसिस और अल्ट्राफिल्ट्रेशन इन प्रोटीनों का उपयोग उन अणुओं की प्रकृति से गुजरने के लिए करते हैं जो अर्ध-पारगम्य झिल्ली से नहीं गुजर सकते हैं; घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन माध्यम में प्रोटीन की गुणवत्ता और घनत्व का कणों पर अधिक प्रभाव पड़ेगा। निपटान की गति तेज है; जेल निस्पंदन एक प्रकार की स्तंभ क्रोमैटोग्राफी है।

2. उपयोग में घुलनशीलता अंतर को अलग करना: इलेक्ट्रो-वर्षा क्योंकि प्रोटीन अणुओं का शुद्ध चार्ज शून्य आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु पर होता है, जिससे अणुओं के बीच इलेक्ट्रोस्टैटिक प्रतिकर्षण कम हो जाता है, एकत्रित करना आसान होता है, और घुलनशीलता न्यूनतम होती है; नमक के घोल के साथ नमक के घोल का उपयोग करने से सांद्रता प्रोटीन की घुलनशीलता को बढ़ाती या घटाती है।

3. चार्ज को अलग-अलग तरीकों से अलग और विश्लेषण किया जाता है, मुख्य सामग्री में इलेक्ट्रोफोरेसिस और आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी शामिल हैं।

4. के तरीकेप्रोटीन शुद्धिप्रोटीन का चयनात्मक अधिशोषण और पृथक्करण कण अधिशोषण की शक्ति का उपयोग करता है।

5. एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी लिगेंड्स के पृथक्करण पर आधारित है। यह जैविक विशेषता प्रोटीन अणुओं को लिगैंड नामक किसी अन्य अणु से सहसंयोजक के बजाय विशेष रूप से बंधने की अनुमति देती है।

6. प्रोटीन शुद्धिकरण की विधि: कम तापमान वाले कार्बनिक विलायक अवक्षेपण विधि: अधिकांश प्रोटीन की घुलनशीलता और अवक्षेपण को कम करने के लिए मेथनॉल, इथेनॉल जैसे पानी के साथ मिश्रणीय कार्बनिक विलायक का उपयोग करें। यह विधि सॉल्टिंग आउट रिज़ॉल्यूशन से अधिक है, लेकिन प्रोटीन अधिक विकृत हो जाता है जब आसान होता है, तो इसे कम तापमान पर किया जाना चाहिए।

शुद्धिकरण कैसे करेंप्रोटीन शुद्धि:

प्रोटीन को कैसे शुद्ध करें, प्रोटीन एक बड़ा अणु है, और एल्ब्यूमिन के विभिन्न आणविक आकार हैं, प्रोटीन और छोटे अणु सामग्री को अलग करने के लिए कुछ सरल तरीके हैं, और प्रोटीन मिश्रण को भी अलग किया जाता है। विभिन्न आणविक आकारों के प्रोटीन को अलग करने की मुख्य विधियाँ डायलिसिस, अल्ट्राफिल्ट्रेशन, जेल निस्पंदन और केन्द्रापसारक पृथक्करण हैं। डायलिसिस और अल्ट्राफिल्ट्रेशन का उपयोग आमतौर पर प्रोटीन पृथक्करण विधियों में किया जाता है। अलग किए जाने वाले डायलिसिस मिश्रण को अर्धपारगम्य झिल्ली से बने डायलिसिस बैग में रखा जाता है, और फिर अलग करने के लिए डायलिसिस समाधान में डुबोया जाता है। अल्ट्राफिल्ट्रेशन एक अर्ध-पारगम्य झिल्ली में केन्द्रापसारक बल या दबाव का उपयोग करके पानी और अन्य छोटे अणुओं को पारित करने और अर्ध-पारगम्य झिल्ली में प्रोटीन को फंसाने की प्रक्रिया है। इन दो तरीकों को प्रोटीन-आधारित मैक्रोमोलेक्यूल्स और अकार्बनिक नमक-आधारित छोटे अणुओं से अलग किया जा सकता है। इन्हें अक्सर नमकीन बनाया जाता है, नमक घोलने की विधि के साथ संयोजन में उपयोग किया जाता है, या अकार्बनिक नमक समाधान का उपयोग करके नमकीन बनाने के बाद इन दो तरीकों को निकालने के लिए पेश किया जा सकता है।

1. साल्टिंग-आउट विधि द्वारा प्रोटीन को कैसे शुद्ध करें: साल्टिंग-आउट विधि का आधार यह है कि नमक की सघनता बढ़ने के साथ तनु नमक घोल में प्रोटीन की घुलनशीलता बढ़ जाएगी, लेकिन जब नमक की सघनता एक निश्चित मान तक बढ़ जाती है, जल गतिविधि बढ़ाई जाएगी. कमी, जो बदले में कुछ प्रोटीनों को आणविक संरचना सतह के माध्यम से चार्ज उत्पन्न करने का कारण बन सकती है, धीरे-धीरे बेअसर हो जाती है, और हाइड्रेशन झिल्ली धीरे-धीरे नष्ट हो जाती है, जो अंततः संबंधित प्रोटीन और अणुओं को ढेर विकसित करने और विभिन्न समाधानों से अवक्षेपित करने का कारण बन सकती है।

2. कार्बनिक विलायक अवक्षेपण विधि: कार्बनिक विलायक में प्रोटीन की घुलनशीलता को कम करने के दो कारण हैं: निर्जलीकरण के साथ नमक समाधान के रूप में प्रोटीन को कैसे शुद्ध किया जाए; दूसरे, ध्रुवीय विलायकों में पानी की तुलना में कार्बनिक विलायकों के ढांकता हुआ स्थिरांक को कम किया जा सकता है।

3. प्रोटीन अवक्षेपण एजेंट: अवक्षेपण एजेंट के रूप में प्रोटीन केवल एक प्रकार या प्रोटीन अवक्षेपण पर कार्य करता है, सामान्य रूप से क्षारीय, प्रोटीन, लेक्टिन और भारी धातुएँ होती हैं।

4. पॉलीथीन ग्लाइकोल अवक्षेपण: पानी में घुलनशील गैर-आयनिक पॉलिमर को कैसे शुद्ध करेंप्रोटीन शुद्धि, जैसे प्रोटीन को अवक्षेपित करने के लिए पॉलीइथाइलीन ग्लाइकोल और सोडियम डेक्सट्रान सल्फेट।