O ácido nucleico divídese en ácido desoxirribonucleico (ADN) e ácido ribonucleico (ARN), entre os que o ARN pódese dividir en ARN ribosómico (ARNr), ARN mensaxeiro (ARNm) e ARN de transferencia (ARNt) segundo diferentes funcións.

O ADN concéntrase principalmente no núcleo, as mitocondrias e os cloroplastos, mentres que o ARN distribúese principalmente no citoplasma.

Dado que as bases purínicas e as bases pirimidínicas teñen dobres enlaces conxugados nos ácidos nucleicos, os ácidos nucleicos teñen as características de absorción ultravioleta. A absorción ultravioleta dos sales de sodio do ADN é de arredor de 260 nm, e a súa absorbancia exprésase como A260, e está no canal de absorción a 230 nm, polo que se pode usar a espectroscopia ultravioleta. Os ácidos nucleicos son determinados cuantitativa e cualitativamente mediante un luminómetro.

Os ácidos nucleicos son anfolitos, que son equivalentes aos poliácidos. Os ácidos nucleicos pódense disociar en anións usando tampones neutros ou alcalinos, e colocarse nun campo eléctrico para moverse cara ao ánodo. Este é o principio da electroforese.

Principios e requisitos de extracción e purificación de ácidos nucleicos

1. Garantir a integridade da estrutura primaria do ácido nucleico

2. Elimina a contaminación doutras moléculas (como excluír a interferencia do ARN ao extraer o ADN)

3. Non debería haber disolventes orgánicos e altas concentracións de ións metálicos que inhiban encimas nas mostras de ácidos nucleicos

4. Reducir ao máximo as substancias macromoleculares como proteínas, polisacáridos e lípidos

Método de extracción e purificación de ácidos nucleicos

1. Método de extracción con fenol/cloroformo

Foi inventado en 1956. Despois de tratar o líquido roto da célula ou o homoxenato de tecido con fenol/cloroformo, os compoñentes do ácido nucleico, principalmente o ADN, disolvense na fase acuosa, os lípidos están principalmente na fase orgánica e as proteínas sitúanse entre as dúas. fases.

2. Precipitación alcohólica

O etanol pode eliminar a capa de hidratación do ácido nucleico e expoñer o grupo fosfato cargado negativamente, e ións cargados positivamente como NA﹢ poden combinarse co grupo fosfato para formar un precipitado.

3. Método da columna cromatográfica

A través do material especial de adsorción a base de sílice, o ADN pode ser adsorbido específicamente, mentres que o ARN e a proteína poden pasar suavemente, e despois usar sal alto e pH baixo para unir o ácido nucleico e eluír con sal baixo e pH alto para separar e purificar nucleicos. ácido.

4. Método alcalino de craqueo térmico

A extracción alcalina utiliza principalmente as diferenzas topolóxicas entre plásmidos circulares pechados covalentemente e a cromatina lineal para separalos. En condicións alcalinas, as proteínas desnaturalizadas son solubles.

5. Método de pirólise en ebulición

A solución de ADN é tratada térmicamente para aproveitar as propiedades das moléculas de ADN lineais para separar fragmentos de ADN do precipitado formado por proteínas desnaturalizadas e restos celulares mediante centrifugación.

6. Método das contas nanomagnéticas

Usando a nanotecnoloxía para mellorar e modificar a superficie das nanopartículas superparamagnéticas, prepáranse perlas nanomagnéticas de óxido de silicio superparamagnéticos. As perlas magnéticas poden recoñecer especificamente e unirse eficientemente ás moléculas de ácido nucleico nunha interface microscópica. Usando as propiedades superparamagnéticas das nanosferas de sílice, baixo a acción de sales caotrópicas (clorhidrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc.) e un campo magnético externo, illaronse ADN e ARN de sangue, tecido animal, alimentos, microorganismos patóxenos e outras mostras.