A separación e purificación de proteínas é amplamente utilizada na investigación e aplicación da bioquímica e é unha importante habilidade operativa. Unha célula eucariota típica pode conter miles de proteínas diferentes, algunhas son moi ricas e outras contén só unhas poucas copias. Para estudar un certoproteína, primeiro é necesario purificar a proteína doutras proteínas e moléculas non proteicas.

1. Método de salgado deproteína:

O sal neutro ten un efecto significativo sobre a solubilidade da proteína. Xeralmente, co aumento da concentración de sal baixo unha concentración de sal baixa, a solubilidade da proteína aumenta. Isto chámase salgado; cando a concentración de sal segue a aumentar, a solubilidade das proteínas diminúe en diferentes graos e sepárase unha tras outra. Este fenómeno chámase salgado.

2. Método de apilado de puntos isoeléctricos:

A repulsión electrostática entre partículas é a menor cando a proteína é estática, polo que a solubilidade tamén é a menor. Os puntos isoeléctricos de varias proteínas son diferentes. O pH da solución de acondicionamento pódese usar para alcanzar o punto isoeléctrico dunha proteína Fai que se acumule, pero este método raramente se usa só e pódese combinar co método de saling-out.

3.Diálise e ultrafiltración:

A diálise utiliza unha membrana semipermeable para separar proteínas de diferentes tamaños moleculares. O método de ultrafiltración usa alta presión ou forza centrífuga para facer que a auga e outras pequenas moléculas de soluto pasen a través dunha membrana semipermeable, mentres que oproteínapermanece na membrana. Podes escoller diferentes tamaños de poro para interceptar proteínas de diferentes pesos moleculares.

4. Método de filtración de xel:

Tamén chamada cromatografía de exclusión de tamaño ou cromatografía de criba molecular, este é un dos métodos máis útiles para separar mesturas de proteínas segundo o tamaño molecular. Os materiais de embalaxe máis utilizados na columna son o xel de glicosa (Sephadex ged) e o xel de agarosa (xel de agarosa).

5.Electroforese:

Baixo a mesma condición de pH, pódense separar varias proteínas debido aos seus diferentes pesos moleculares e diferentes cargas no campo eléctrico. Paga a pena prestar atención á electroforese de conxunto isoeléctrico, que usa un anfólito como portador. Durante a electroforese, o anfólito forma un gradiente de pH engadido gradualmente desde o electrodo positivo ata o negativo. Cando a proteína cunha determinada carga nada nela, alcanzarase entre si. A posición do pH do punto eléctrico é descontinua, e este método pódese utilizar para analizar e preparar varias proteínas.

6. Cromatografía de comunicación iónica:

Os axentes de comunicación iónica inclúen axentes de comunicación catiónicos (como a carboximetil celulosa; CM-celulosa) e os axentes de comunicación aniónicos (dietilaminoetil celulosa). Ao atravesar a columna de cromatografía de comunicación iónica, a proteína coa carga oposta á do axente de comunicación iónica adsórbese no axente de comunicación iónica e, a continuación, o adsorbido.proteínaelúese cambiando o pH ou a forza iónica.

7.Cromatografía de afinidade:

A cromatografía de afinidade é un método moi útil para separar proteínas. A miúdo require só un paso para separar unha determinada proteína que se vai purificar dunha mestura desordenada de proteínas de alta pureza.

Este método baséase na unión específica e non covalente de certas proteínas a outra molécula chamada ligando (Ligando).

O principio básico:

as proteínas existen nunha mestura desordenada nos tecidos ou células, e cada tipo de célula contén miles de proteínas diferentes. Polo tanto, a distinción entre proteínas é unha parte importante da bioquímica, e non foi só. Ou un conxunto de métodos preparados pode eliminar calquera tipo de proteína dunha proteína mesturada desordenada, polo que adoitan usarse varios métodos en combinación.