A separación e purificación de proteínas é amplamente utilizada na investigación e aplicación da bioquímica e é unha importante habilidade operativa. Unha célula eucariota típica pode conter miles de proteínas diferentes, algunhas son moi ricas e outras contén só unhas poucas copias. Para estudar un certoproteína, primeiro é necesario purificar a proteína doutras proteínas e moléculas non proteicas.

1. Método de salgado deproteína:

O sal neutro ten un efecto significativo sobre a solubilidade da proteína. Xeralmente, co aumento da concentración de sal baixo unha concentración de sal baixa, a solubilidade da proteína aumenta. Isto chámase salgado; cando a concentración de sal segue a aumentar, a solubilidade da proteína diminúe en graos variables e sepárase unha tras outra. Este fenómeno chámase salgado.

2. Método de apilado de puntos isoeléctricos:

A repulsión electrostática entre partículas é a menor cando a proteína é estática, polo que a solubilidade tamén é a menor. Os puntos isoeléctricos de varias proteínas son diferentes. O pH da solución de acondicionamento pódese usar para alcanzar o punto isoeléctrico dunha proteína Fai que se acumule, pero este método raramente se usa só e pódese combinar co método de saling-out.

3.Diálise e ultrafiltración:

A diálise utiliza unha membrana semipermeable para separar proteínas de diferentes tamaños moleculares. O método de ultrafiltración usa alta presión ou forza centrífuga para facer que a auga e outras pequenas moléculas de soluto pasen a través dunha membrana semipermeable, mentres que oproteínapermanece na membrana. Podes escoller diferentes tamaños de poro para interceptar proteínas de diferentes pesos moleculares.

4. Método de filtración de xel:

Tamén chamada cromatografía de exclusión de tamaño ou cromatografía de criba molecular, este é un dos métodos máis útiles para separar mesturas de proteínas segundo o tamaño molecular. Os materiais de embalaxe máis utilizados na columna son o xel de glicosa (Sephadex ged) e o xel de agarosa (xel de agarosa).

5.Electroforese:

Baixo a mesma condición de pH, pódense separar varias proteínas debido aos seus diferentes pesos moleculares e diferentes cargas no campo eléctrico. Paga a pena prestar atención á electroforese de conxunto isoeléctrico, que usa un anfólito como portador. Durante a electroforese, o anfólito forma un gradiente de pH engadido gradualmente desde o electrodo positivo ata o negativo. Cando a proteína cunha determinada carga nada nela, alcanzarase entre si. A posición do pH do punto eléctrico é descontinua e este método pódese utilizar para analizar e preparar varias proteínas.

6. Cromatografía de comunicación iónica:

Os axentes de comunicación iónica inclúen axentes de comunicación catiónicos (como a carboximetil celulosa; CM-celulosa) e os axentes de comunicación aniónicos (dietilaminoetil celulosa). Ao atravesar a columna de cromatografía de comunicación iónica, a proteína coa carga oposta á do axente de comunicación iónica adsórbese no axente de comunicación iónica e, a continuación, o adsorbido.proteínaelúese cambiando o pH ou a forza iónica.

7. Cromatografía de afinidade:

A cromatografía de afinidade é un método moi útil para separar proteínas. Moitas veces require só un paso para separar unha determinada proteína para ser purificada dunha mestura desordenada de proteínas de alta pureza.

Este método baséase na unión específica e non covalente de certas proteínas a outra molécula chamada ligando (Ligando).

O principio básico:

as proteínas existen nunha mestura desordenada nos tecidos ou células, e cada tipo de célula contén miles de proteínas diferentes. Polo tanto, a distinción entre proteínas é unha parte importante da bioquímica, e non foi só. Ou un conxunto de métodos preparados pode eliminar calquera tipo de proteína dunha proteína mesturada desordenada, polo que adoitan usarse varios métodos en combinación.