Metoaden fanprotein suvering:

De metoade fan proteïnereiniging, skieding en suvering fan proteïne, it proteïne wurdt frijlitten út 'e orizjinele sellen of weefsels yn in oploste steat en bliuwt yn' e oarspronklike natuerlike steat sûnder ferlies fan biologyske aktiviteit. Om dy reden moat it materiaal dier- en fetweefsel fuorthelje, it siedmateriaal moat sels de fersmoarging fan de siedmantel fan stoffen as tanninen ôfskie, en it oaljesied moat it leafst in leech siedend organysk oplosmiddel brûke.

1. De metoade fan proteïnereiniging, grutte en ferskillende metoaden foar skiedinganalyse: dialyse en ultrafiltraasje brûke dizze proteïnen om troch de natuer fan molekulen te gean dy't net troch it semi-permeabele membraan passe kinne; density gradient centrifugation De kwaliteit en tichtens fan it aaiwyt yn it medium sil in gruttere ynfloed hawwe op dieltsjes. Settling snelheid is flugger; gelfiltraasje is in soarte fan kolomchromatografy.

2. Skieding fan solubility ferskil yn gebrûk: electro-precipitation omdat de netto lading fan protein molekulen is op nul isoelectric punt, it ferminderjen fan de electrostatic ôfwiking tusken molekulen, maklik te aggregearjen, en minimale oplosberens; sâltoplossing brûkt mei sâltoplossing De konsintraasje fergruttet of fermindert de oplosberens fan it aaiwyt.

3. De lading wurdt skieden en analysearre troch ferskate metoaden, de haadynhâld is ûnder oaren elektrophoresis en ionútwikselingchromatografy.

4. Metoaden fanprotein suveringDe selektive adsorpsje en skieding fan aaiwiten brûke de sterkte fan partikeladsorpsje.

5. Affinity chromatography is basearre op de skieding fan liganden. Dizze biologyske karakteristyk lit proteïnemolekulen spesifyk bine dan kovalent oan in oare molekule neamd in ligand.

6. Metoade fan proteïnereiniging: Low-temperatuer organyske solvent-ôfslachmetoade: Brûk organyske solvents dy't mei wetter misbrûkber binne, lykas methanol, ethanol, om de oplosberens en delslach fan 'e measte aaiwiten te ferminderjen. Dizze metoade is heger as de resolúsje salting út, mar it aaiwyt denatures mear As maklik, it moat dien wurde op lege temperatuer.

Hoe te reinigjenprotein suvering:

Hoe te reinigjen aaiwyt, aaiwyt is in grut molekule, en ferskate molekulêre maten fan albumine, der binne wat ienfâldiger metoaden te skieden aaiwyt en lytse molekulen materialen, en ek skieden aaiwyt mingsel. De wichtichste metoaden foar it skieden fan aaiwiten fan ferskate molekulêre grutte binne dialyse, ultrafiltraasje, gelfiltraasje, en sintrifugale skieding. Dialyse en ultrafiltraasje wurde faak brûkt yn metoaden foar proteïneskieding. It te skieden dialysegemik wurdt pleatst yn in dialysetas makke fan in semipermeabel membraan, en dan ûnderdompele yn 'e dialyseoplossing foar skieding. Ultrafiltraasje is it proses fan it trochjaan fan wetter en oare lytse molekulen mei help fan sintrifugale krêft as druk yn in semi-permeabel membraan en fangen fan aaiwiten yn it semi-permeabele membraan. Dizze twa metoaden kinne wurde skieden fan proteïne-basearre makromolekulen en anorganyske sâlt-basearre lytse molekulen. Se wurde faak útsalte, brûkt yn kombinaasje mei de sâltoplossingsmetoade, of kinne wurde yntrodusearre om dizze twa metoaden út te nimmen nei it sâltsjen mei anorganyske sâltoplossingen.

1. Hoe kinne jo proteïne reinigje troch salting-out-metoade: De basis fan sâlt-out-metoade is dat de oplosberens fan proteïne yn verdunde sâltoplossing sil tanimme mei de tanimming fan sâltkonsintraasje, mar as de sâltkonsintraasje ta in bepaalde wearde tanimt, wetteraktiviteit wurdt ferhege. Fermindering, wat op syn beurt kin feroarsaakje guon aaiwiten te generearjen ladingen troch de molekulêre struktuer oerflak wurde stadichoan neutralisearre, en de hydratatie membraan wurdt stadichoan ferneatige, dat kin úteinlik feroarsaakje besibbe aaiwiten en molekulen te ûntwikkeljen agglomeraasje en precipitate út ferskate oplossings.

2. Organyske solvent-ôfslachmetoade: D'r binne twa redenen om de oplosberens fan proteïne yn organyske solvents te ferminderjen: hoe't jo proteïne as sâltoplossing mei útdroeging reinigje; secondly, de dielectric konstante fan organyske solvents as wetter kin wurde fermindere Yn polêre solvents.

3. Protein precipitating agent: proteïne as precipitating agent allinnich hannelet op ien type of ien fan proteïne delslach, mienskiplik binne alkaline, protein, lectin, en swiere metalen.

4. Polyetyleen glycol delslach: Hoe kinne wetteroplosbere net-ionyske polymers suverje foarprotein suvering, lykas polyethylene glycol en natrium dextran sulfate te precipitate aaiwiten.