La séparation et la purification des protéines sont largement utilisées dans la recherche et les applications en biochimie et constituent une compétence opérationnelle importante. Une cellule eucaryote typique peut contenir des milliers de protéines différentes, certaines sont très riches et d’autres n’en contiennent que quelques copies. Afin d'étudier un certainprotéine, il est nécessaire de purifier d’abord la protéine des autres protéines et molécules non protéiques.

1. Méthode de relargageprotéine:

Le sel neutre a un effet significatif sur la solubilité des protéines. Généralement, avec l’augmentation de la concentration en sel sous une faible concentration en sel, la solubilité des protéines augmente. C'est ce qu'on appelle le salage ; lorsque la concentration en sel continue d'augmenter, la solubilité des protéines diminue à des degrés divers et se sépare les unes après les autres. Ce phénomène est appelé relargage.

2. Méthode d’empilement de points isoélectriques :

La répulsion électrostatique entre les particules est la plus faible lorsque la protéine est statique, donc la solubilité est également la plus faible. Les points isoélectriques de diverses protéines sont différents. Le pH de la solution de conditionnement peut être utilisé pour atteindre le point isoélectrique d'une protéine et la faire accumuler, mais cette méthode est rarement utilisée seule et peut être combinée avec la méthode du relargage.

3.Dialyse et ultrafiltration :

La dialyse utilise une membrane semi-perméable pour séparer les protéines de différentes tailles moléculaires. La méthode d'ultrafiltration utilise une haute pression ou une force centrifuge pour faire passer l'eau et d'autres petites molécules de soluté à travers une membrane semi-perméable, tandis que leprotéinereste sur la membrane. Vous pouvez choisir différentes tailles de pores pour intercepter des protéines de différents poids moléculaires.

4. Méthode de filtration sur gel :

Également appelée chromatographie d’exclusion stérique ou chromatographie sur tamis moléculaire, il s’agit de l’une des méthodes les plus utiles pour séparer les mélanges de protéines en fonction de la taille moléculaire. Les matériaux de remplissage les plus couramment utilisés dans la colonne sont le gel de glucose (Sephadex ged) et le gel d'agarose (gel d'agarose).

5.Électrophorèse :

Dans les mêmes conditions de pH, diverses protéines peuvent être séparées en raison de leurs différents poids moléculaires et de leurs différentes charges dans le champ électrique. Il convient de prêter attention à l'électrophorèse isoélectrique, qui utilise un ampholyte comme support. Lors de l'électrophorèse, l'ampholyte forme un gradient de pH ajouté progressivement de l'électrode positive à l'électrode négative. Lorsque des protéines avec une certaine charge y nagent, elles se rejoignent. La position pH du point électrique est discontinue et cette méthode peut être utilisée pour analyser et préparer diverses protéines.

6.Chromatographie de communication ionique :

les agents de communication ionique comprennent des agents de communication cationiques (tels que la carboxyméthylcellulose ; CM-cellulose) et des agents de communication anioniques (diéthylaminoéthylcellulose). Lors du passage à travers la colonne de chromatographie de communication ionique, la protéine ayant la charge opposée à l'agent de communication ionique est adsorbée sur l'agent de communication ionique, puis la protéine adsorbéeprotéineest élué en modifiant le pH ou la force ionique.

7.Chromatographie d'affinité :

La chromatographie d'affinité est une méthode extrêmement utile pour séparer les protéines. Il suffit souvent d’une seule étape pour séparer une certaine protéine à purifier d’un mélange de protéines désordonné de haute pureté.

Cette méthode repose sur la liaison spécifique plutôt que covalente de certaines protéines à une autre molécule appelée ligand (Ligand).

Le principe de base :

les protéines existent dans un mélange désordonné dans les tissus ou les cellules, et chaque type de cellule contient des milliers de protéines différentes. Par conséquent, la distinction entre les protéines constitue une partie importante de la biochimie, et elle n’est pas la seule. Ou encore, un ensemble de méthodes prêtes à l'emploi peut éliminer tout type de protéine d'un mélange de protéines désordonné, c'est pourquoi plusieurs méthodes sont souvent utilisées en combinaison.