Mikä on puhdistusmenetelmäproteiinien puhdistusjärjestelmä? On tarpeen tuntea puhdistetun proteiinin koodaava DNA-sekvenssi, nähdä, mitkä solut tai kudokset yli-ilmentyvät kohdegeenissä, ja suunnitella geenialukkeet monistamaan kohde-DNA-fragmentin arf. Tämä on niin kutsuttu kohdegeenifragmenttien hankinta.

Ekspressiovektorin rakentaminen: Prokaryoottisessa tai eukaryoottisessa ilmentämisvektorissa, jolla on itse saadun geenin ilmentymisen ominaisuudet, tämän vaiheen pääongelma on plasmidin ja mielenkiinnon kohteena olevan geenin sekä ilmentämisjärjestelmän rakentaminen. Prokaryoottinen ilmentymisaika on lyhyt, kustannukset ovat alhaiset ja suuri määrä ilmentymistä on etusijalla; geeni ei ilmenty E. colissa, ja ongelma ilmenee kodonin optimoinnissa. Proteiinin paremman aktiivisuuden ja puhdistumisen vuoksi tutkijat päättivät ilmentää Pichi-hiivassa. Kodonin optimoinnin onnistunut ilmentäminen on tärkeää.

Mikä on proteiininpuhdistusjärjestelmän puhdistusmenetelmä:

1. Sademäärä.

2. Elektroforeesi: Varautunut proteiini on korkeampi tai matalampi kuin sen isoelektrinen piste ja se voidaan siirtää sähkökentän negatiiviselle elektrodille tai positiiviselle elektrodille. Tukikalvoelektroforeesi, elektroforeesi jne.

3. Dialyysi: Menetelmä, jossa käytetään kahta dialyysipussia suurten molekyylien erottamiseen proteiineista ja pienimolekyylisistä orgaanisista yhdisteistä.

4. Kromatografia: Ioninvaihtokromatografia käyttää proteiinien vapaita ominaisuuksia. Tietyssä pH:ssa proteiinien varaukset ja ominaisuudet ovat erilaisia, ja ne voidaan erottaa ioninvaihtokromatografialla. Anioninvaihtokromatografiassa proteiinit, joilla on pieni negatiivinen teho, eluoidaan ensin. Molekyyliseulat, tunnetaan myös nimellä geelisuodatus. Pienet proteiinit pääsevät huokosiin ja pysyvät niissä pitkään. Suuret proteiinit eivät pääse sisään huokosiin ja virtaa ulos suoraan.

5. Mikä on puhdistusmenetelmäproteiinien puhdistusjärjestelmä? Ultrasentrifugointi: Proteiinipuhdistusta voidaan käyttää molekyylipainon määrittämiseen ja sitä voidaan käyttää proteiinina. Eritiheyksisten proteiinien muodostuminen erotetaan.