Proteiinien erottaminen ja puhdistaminen on laajalti käytössä biokemian tutkimuksessa ja sovelluksissa, ja se on tärkeä toiminnallinen taito. SCG Protein Purification System Company-Saipu Instrument on koonnut raaka- ja hienoerotussisällönproteiiniapuhdistusta kaikille. Tyypillinen eukaryoottisolu voi sisältää tuhansia erilaisia ​​proteiineja, joista osa on erittäin rikkaita ja toiset sisältävät vain muutamia kopioita. Tietyn proteiinin tutkimiseksi on ensin puhdistettava proteiini muista proteiineista ja ei-proteiinimolekyyleistä.

Karkea erottelu

Kun proteiiniuute (joskus sekoitettuna nukleiinihappojen, polysakkaridien jne. kanssa) saadaan, valitaan joukko sopivia menetelmiä halutun erottelemiseksi.proteiiniamuista epäpuhtauksista. Yleensä tässä erotusvaiheessa käytetään sellaisia ​​menetelmiä kuin suolaaminen, isoelektrisen pisteen kerääntyminen ja orgaanisen liuottimen fraktiointi. Näille menetelmille on ominaista yksinkertaisuus ja suuri prosessointikapasiteetti, jolla voidaan poistaa monia epäpuhtauksia ja konsentroida proteiiniliuos. Jotkut proteiiniuutteet ovat tilavuudeltaan suuria, eivätkä ne sovellu tiivistämiseen keräämällä tai suolaamalla. Voit valita tiivistämiseen ultrasuodatuksen, geelisuodatuksen, pakastetyhjökuivauksen tai muita menetelmiä.

Hieno erottelu

Näytteen karkean fraktioinnin jälkeen tilavuus on yleensä pieni ja suurin osa epäpuhtauksista on poistettu. Lisäpuhdistusta varten kromatografiamenetelmiin kuuluvat yleensä geelisuodatus, ioninvaihtokromatografia, adsorptiokromatografia ja affiniteettikromatografia. Tarvittaessa voit myös valita lopulliseksi puhdistusprosessiksi elektroforeesin, mukaan lukien vyöhykeelektroforeesin, isoelektrisen pistesarjan jne. Jaotustason erottelumenetelmä on yleensä suunnittelultaan pieni, mutta resoluutioltaan korkea.

Kiteyttäminen on viimeinen proteiinien erotus- ja puhdistusprosessi. Vaikka kiteytysprosessi ei takaa, että proteiinin tulee olla tasalaatuista, se tapahtuu vain silloin, kun tietyllä proteiinilla on etu liuoksessa muodostaa kiteen. Itse kiteytysprosessiin liittyy tietty puhdistusaste, ja uudelleenkiteyttäminen voi poistaa pienen määrän väärennettyä proteiinia. Denaturoitumisesta lähtienproteiiniaei ole koskaan löydetty kiteytysprosessin aikana, proteiinien kiteytyminen ei ole vain merkki puhtaudesta, vaan myös tehokas ohje tuotteen luonnollisessa tilassa.