Nukleiinihappo jaetaan deoksiribonukleiinihappoon (DNA) ja ribonukleiinihappoon (RNA), joista RNA voidaan jakaa ribosomaaliseen RNA:han (rRNA), lähetti-RNA:han (mRNA) ja siirto-RNA:han (tRNA) eri toimintojen mukaan.

DNA on pääasiassa keskittynyt tumaan, mitokondrioihin ja kloroplasteihin, kun taas RNA on pääasiassa jakautunut sytoplasmaan.

Koska puriiniemäksillä ja pyrimidiiniemäksillä on konjugoituja kaksoissidoksia nukleiinihapoissa, nukleiinihapoilla on ultraviolettiabsorption ominaisuuksia. DNA:n natriumsuolojen ultraviolettiabsorptio on noin 260 nm ja sen absorbanssi ilmaistaan ​​A260:na ja se on absorptioalueen kohdalla 230 nm:ssä, joten ultraviolettispektroskopiaa voidaan käyttää. Nukleiinihapot määritetään kvantitatiivisesti ja laadullisesti luminometrillä.

Nukleiinihapot ovat amfolyyttejä, jotka vastaavat polyhappoja. Nukleiinihapot voidaan hajottaa anioneiksi käyttämällä neutraaleja tai emäksisiä puskureita ja asettaa sähkökenttään siirtymään kohti anodia. Tämä on elektroforeesin periaate.

Nukleiinihappojen uuttamisen ja puhdistamisen periaatteet ja vaatimukset

1. Varmista nukleiinihapon primaarirakenteen eheys

2. Eliminoi muiden molekyylien kontaminaatio (kuten RNA-häiriön poissulkeminen DNA:ta uutettaessa)

3. Nukleiinihapponäytteissä ei saa olla orgaanisia liuottimia ja korkeita metalli-ionien pitoisuuksia, jotka estävät entsyymejä

4. Vähennä makromolekyylisiä aineita, kuten proteiineja, polysakkarideja ja lipidejä niin paljon kuin mahdollista

Nukleiinihapon uutto- ja puhdistusmenetelmä

1. Fenoli/kloroformiuuttomenetelmä

Se keksittiin vuonna 1956. Kun solun rikkoutunut neste tai kudoshomogenaatti on käsitelty fenoli/kloroformilla, nukleiinihappokomponentit, pääasiassa DNA, liukenevat vesifaasiin, lipidit ovat pääasiassa orgaanisessa faasissa ja proteiinit sijaitsevat näiden kahden välissä. vaiheet.

2. Alkoholisaostuminen

Etanoli voi poistaa nukleiinihapon hydraatiokerroksen ja paljastaa negatiivisesti varautuneen fosfaattiryhmän, ja positiivisesti varautuneet ionit, kuten NA﹢, voivat yhdistyä fosfaattiryhmän kanssa muodostaen sakan.

3. Kromatografinen pylväsmenetelmä

Erityisen piidioksidipohjaisen adsorptiomateriaalin avulla DNA voidaan adsorboida spesifisesti, kun taas RNA ja proteiini voivat kulkea sujuvasti läpi ja sitten käyttää korkeaa suolaa ja alhaista pH:ta nukleiinihapon sitomiseen ja eluoida matalalla suolalla ja korkealla pH:lla nukleiinin erottamiseksi ja puhdistamiseksi. happoa.

4. Lämpökrakkaus alkalimenetelmä

Alkalinen uutto käyttää pääasiassa kovalenttisesti suljettujen pyöreän plasmidien ja lineaarisen kromatiinin välisiä topologisia eroja niiden erottamiseen. Alkalisissa olosuhteissa denaturoidut proteiinit ovat liukoisia.

5. Kiehumispyrolyysimenetelmä

DNA-liuos lämpökäsitellään lineaaristen DNA-molekyylien ominaisuuksien hyödyntämiseksi DNA-fragmenttien erottamiseksi denaturoitujen proteiinien ja solujätteen muodostamasta sakasta sentrifugoimalla.

6. Nanomagneettisten helmien menetelmä

Superparamagneettisten nanohiukkasten pinnan parantamiseksi ja muokkaamiseksi nanoteknologiaa käyttämällä valmistetaan superparamagneettisia piioksidinanomagneettisia helmiä. Magneettiset helmet voivat spesifisesti tunnistaa nukleiinihappomolekyylejä ja sitoutua niihin tehokkaasti mikroskooppisella rajapinnalla. Käyttämällä piidioksidin nanopallojen superparamagneettisia ominaisuuksia, kaotrooppisten suolojen (guanidiinihydrokloridi, guanidiini-isotiosyanaatti jne.) ja ulkoisen magneettikentän vaikutuksesta DNA ja RNA eristettiin verestä, eläinkudoksesta, ruoasta, patogeenisistä mikro-organismeista ja muista näytteistä.