روش هایتصفیه پروتئین:

روش خالص سازی پروتئین، جداسازی و خالص سازی پروتئین، پروتئین به صورت حل شده از سلول ها یا بافت های اصلی آزاد می شود و بدون از دست دادن فعالیت بیولوژیکی در حالت طبیعی اولیه باقی می ماند. به همین دلیل، ماده باید بافت حیوانی و چربی را حذف کند، مواد دانه باید حتی آلودگی پوسته دانه را از موادی مانند تانن جدا کند و دانه روغنی ترجیحاً باید از حلال آلی کم جوش استفاده کند.

1. روش خالص سازی پروتئین، اندازه و روش های مختلف تجزیه و تحلیل جداسازی: دیالیز و اولترافیلتراسیون از این پروتئین ها برای عبور از طبیعت مولکول هایی استفاده می کنند که نمی توانند از غشای نیمه تراوا عبور کنند. سانتریفیوژ گرادیان چگالی کیفیت و چگالی پروتئین در محیط تأثیر بیشتری بر ذرات خواهد داشت. سرعت تسویه سریعتر است. فیلتراسیون ژل نوعی کروماتوگرافی ستونی است.

2. تفکیک تفاوت حلالیت در استفاده: رسوب الکتریکی به دلیل اینکه بار خالص مولکول های پروتئین در نقطه ایزوالکتریک صفر است، دافعه الکترواستاتیکی بین مولکول ها را کاهش می دهد، تجمع آسان و حداقل حلالیت را کاهش می دهد. محلول نمک مورد استفاده با محلول نمک غلظت حلالیت پروتئین را افزایش یا کاهش می دهد.

3. بار با روش های مختلف جدا و آنالیز می شود، محتویات اصلی شامل الکتروفورز و کروماتوگرافی تبادل یونی است.

4. روش هایتصفیه پروتئینجذب انتخابی و جداسازی پروتئین ها از قدرت جذب ذرات استفاده می کند.

5. کروماتوگرافی میل ترکیبی بر اساس جداسازی لیگاندها است. این ویژگی بیولوژیکی به مولکول های پروتئین اجازه می دهد تا به طور خاص به جای کووالانسی به مولکول دیگری به نام لیگاند متصل شوند.

6. روش تصفیه پروتئین: روش رسوب با حلال آلی در دمای پایین: برای کاهش حلالیت و رسوب اکثر پروتئین ها از حلال های آلی قابل اختلاط با آب مانند متانول، اتانول استفاده کنید. این روش بالاتر از رزولوشن نمک زدایی است، اما پروتئین بیشتر دناتوره می شود در صورت آسانی، باید در دمای پایین انجام شود.

نحوه تطهیرتصفیه پروتئین:

نحوه خالص سازی پروتئین، پروتئین یک مولکول بزرگ است و اندازه های مولکولی مختلف آلبومین، روش های ساده تری برای جداسازی پروتئین و مواد مولکولی کوچک و همچنین مخلوط پروتئین جداسازی شده وجود دارد. روش های اصلی جداسازی پروتئین ها با اندازه های مختلف مولکولی عبارتند از دیالیز، اولترافیلتراسیون، فیلتراسیون ژل و جداسازی گریز از مرکز. دیالیز و اولترافیلتراسیون معمولاً در روش های جداسازی پروتئین استفاده می شود. مخلوط دیالیز که قرار است جدا شود در کیسه دیالیز ساخته شده از یک غشای نیمه تراوا قرار می گیرد و سپس برای جداسازی در محلول دیالیز غوطه ور می شود. اولترافیلتراسیون فرآیند عبور آب و سایر مولکول های کوچک با استفاده از نیروی گریز از مرکز یا فشار در یک غشای نیمه تراوا و به دام انداختن پروتئین ها در غشای نیمه تراوا است. این دو روش را می توان از ماکرومولکول های مبتنی بر پروتئین و مولکول های کوچک مبتنی بر نمک معدنی جدا کرد. آنها اغلب نمک زدایی می شوند، همراه با روش انحلال نمک استفاده می شوند، یا می توان آنها را برای حذف این دو روش پس از نمک زدن با استفاده از محلول های نمک معدنی معرفی کرد.

1. نحوه خالص سازی پروتئین به روش نمک زدایی: اساس روش نمک زدایی این است که با افزایش غلظت نمک، حلالیت پروتئین در محلول نمک رقیق افزایش می یابد، اما زمانی که غلظت نمک به مقدار معینی افزایش یابد، فعالیت آب افزایش خواهد یافت. کاهش، که به نوبه خود می تواند باعث شود که برخی از پروتئین ها بارهایی را از طریق سطح ساختار مولکولی ایجاد کنند تا به تدریج خنثی شود، و غشای هیدراتاسیون به تدریج از بین می رود، که در نهایت می تواند باعث ایجاد تجمع پروتئین ها و مولکول های مرتبط شود و از محلول های مختلف رسوب کند.

2. روش رسوب با حلال آلی: دو دلیل برای کاهش حلالیت پروتئین در حلال های آلی وجود دارد: نحوه خالص سازی پروتئین به عنوان محلول نمک با کم آبی. در مرحله دوم، ثابت دی الکتریک حلال های آلی نسبت به آب را می توان در حلال های قطبی کاهش داد.

3. عامل رسوب‌دهنده پروتئین: پروتئین به‌عنوان عامل رسوب‌دهنده تنها بر روی یک نوع یا یکی از رسوب‌های پروتئینی اثر می‌گذارد، موارد رایج عبارتند از: قلیایی، پروتئین، لکتین و فلزات سنگین.

4. رسوب پلی اتیلن گلیکول: نحوه خالص سازی پلیمرهای غیر یونی محلول در آب برایتصفیه پروتئینمانند پلی اتیلن گلیکول و سدیم دکستران سولفات برای رسوب دادن پروتئین ها.