Azido nukleikoa azido desoxirribonukleiko (DNA) eta azido erribonukleiko (RNA) banatzen da, eta horien artean RNA RNA erribosomiko (rRNA), RNA mezularia (mRNA) eta transferentzia RNA (tRNA) funtzio ezberdinen arabera bana daiteke.

DNA, batez ere, nukleoan, mitokondrioetan eta kloroplastoetan kontzentratzen da, eta RNA, berriz, zitoplasman banatzen da nagusiki.

Base purinikoak eta base pirimidikoak azido nukleikoetan lotura bikoitz konjokatuak dituztenez, azido nukleikoek ultramoreen xurgapenaren ezaugarriak dituzte. DNA sodio-gatzen ultramorearen xurgapena 260 nm ingurukoa da, eta bere xurgapena A260 gisa adierazten da, eta xurgapen-hobian dago 230 nm-ra, beraz, espektroskopia ultramorea erabil daiteke. Azido nukleikoak luminometro batek kuantitatiboki eta kualitatiboki zehazten ditu.

Azido nukleikoak anfolitoak dira, poliazidoen parekoak. Azido nukleikoak anioietan disozia daitezke tampon neutroak edo alkalinoak erabiliz, eta eremu elektriko batean jar daitezke anodorantz mugitzeko. Hau da elektroforesiaren printzipioa.

Azido nukleikoak erauzteko eta arazteko printzipioak eta eskakizunak

1. Azido nukleikoaren egitura primarioaren osotasuna ziurtatzea

2. Ezabatu beste molekulen kutsadura (adibidez, DNA ateratzerakoan RNA interferentziak baztertzea)

3. Ez luke disolbatzaile organikorik eta azido nukleikoen laginetan entzimak inhibitzen dituzten metal ioien kontzentrazio handirik egon behar.

4. Proteinak, polisakaridoak eta lipidoak bezalako substantzia makromolekularrak ahalik eta gehien murriztea

Azido nukleikoak erauzteko eta arazteko metodoa

1. Fenol/kloroformoa erauzteko metodoa

1956an asmatu zen. Zelula hautsitako likidoa edo ehun homogeneoa fenol/kloroformoz tratatu ondoren, azido nukleikoen osagaiak, batez ere DNA, ur fasean disolbatzen dira, lipidoak batez ere fase organikoan daude eta proteinak bien artean kokatzen dira. faseak.

2. Alkoholaren prezipitazioa

Etanolak azido nukleikoaren hidratazio-geruza ezabatu eta negatiboki kargatutako fosfato taldea agerian utzi dezake, eta NA﹢ bezalako positiboki kargatutako ioiak fosfato taldearekin konbina daitezke hauspeakada bat sortzeko.

3. Zutabe kromatografikoaren metodoa

Silicean oinarritutako adsortzio-material bereziaren bidez, DNA bereziki xurgatu daiteke, RNA eta proteina leunki igaro daitezkeen bitartean, eta, ondoren, gatz altua eta pH baxua erabili azido nukleikoa lotzeko, eta gatz baxuarekin eta pH altuarekin elitu nukleikoak bereizteko eta arazteko. azidoa.

4. Cracking termiko alkali metodoa

Erauzketa alkalinoak batez ere kobalente itxitako plasmido zirkularren eta kromatina linealaren arteko desberdintasun topologikoak erabiltzen ditu haiek bereizteko. Baldintza alkalinoetan, proteina desnaturalizatuak disolbagarriak dira.

5. Irakiten pirolisi metodoa

DNA-disoluzioa bero-tratamendua da, DNA molekula linealen propietateak aprobetxatzeko proteina desnaturalizatuek eta zelula-hondakinek eratutako hauspeaketatik DNA zatiak bereizteko zentrifugazioaren bidez.

6. Ale nanomagnetikoak metodoa

Nanoteknologia erabiliz, nanopartikula superparamagnetikoen gainazala hobetzeko eta aldatzeko, silizio oxido superparamagnetikoko ale nanomagnetikoak prestatzen dira. Ale magnetikoek bereziki identifikatu eta eraginkortasunez lotu ditzakete azido nukleikoko molekulak interfaze mikroskopiko batean. Silize nanosferen propietate superparamagnetikoak erabiliz, gatz kaotropikoen (guanidina klorhidratoa, guanidina isotiozianatoa, etab.) eta kanpoko eremu magnetiko baten eraginez, DNA eta RNA odoletik, animalien ehunetatik, elikagaietatik, mikroorganismo patogenoetatik eta beste laginetatik isolatu ziren.