Proteinak arazteko metodoak eta arazketa

-ren metodoakproteinen arazketa:

Proteinak arazteko, bereizteko eta proteinak arazteko metodoa, proteina jatorrizko zelula edo ehunetatik askatzen da disolbatutako egoeran eta jatorrizko egoera naturalean geratzen da jarduera biologikoa galdu gabe. Hori dela eta, materialak animalia eta gantz-ehunak kendu behar ditu, haziaren materialak taninoak bezalako substantzien haziaren estalkiaren kutsadura ere kendu behar du, eta olio-haziak hobe irakiten duen disolbatzaile organiko bat erabili behar du.

1. Proteinak arazteko metodoa, tamaina eta bereizketa aztertzeko metodo desberdinak: dialisiak eta ultrairagazkiak proteina hauek erabiltzen dituzte mintz erdi-iragazkorra igaro ezin diren molekulen izaeratik igarotzeko; dentsitate-gradientearen zentrifugazioa Erdiguneko proteinen kalitateak eta dentsitateak eragin handiagoa izango du partikulen gainean. Likidazio abiadura azkarragoa da; gel-iragazkia zutabe-kromatografia moduko bat da.

2. Erabileran disolbagarritasun-diferentzia bereiztea: elektro-prezipitazioa, proteina molekulen karga garbia zero puntu isoelektrikoan dagoelako, molekulen arteko aldaratze elektrostatikoa murrizten du, agregatzeko erraza eta disolbagarritasun minimoa; gatz-disoluzioarekin erabiltzen den gatz-disoluzioa Kontzentrazioak proteinaren disolbagarritasuna handitu edo gutxitzen du.

3. Karga metodo ezberdinen bidez bereizten eta aztertzen da, eduki nagusien artean elektroforesia eta ioi-truke kromatografia daude.

4.-ren metodoakproteinen arazketaProteinen adsortzio eta bereizketa selektiboak partikulen adsortzioaren indarra erabiltzen dute.

5. Afinitate-kromatografia ligandoen bereizketan oinarritzen da. Ezaugarri biologiko honi esker, proteina-molekulak ligando izeneko beste molekula batera modu kobalentean espresuki lotzen dira.

6. Proteinak arazteko metodoa: Tenperatura baxuko disolbatzaile organikoak hauspetatzeko metodoa: Urarekin nahasten diren disolbatzaile organikoak erabili, hala nola metanola, etanola, proteina gehienen disolbagarritasuna eta prezipitazioa murrizteko. Metodo hau gatzatzearen bereizmena baino handiagoa da, baina proteinak gehiago desnaturalizatzen du Erraza denean, tenperatura baxuan egin behar da.

6ca4b93f5

Nola araztuproteinen arazketa:

Proteina nola araztu, proteina molekula handi bat da, eta albuminaren hainbat tamaina molekularra, proteina eta molekula txikiko materialak bereizteko metodo errazagoak daude, eta proteina nahasketa bereizia ere bada. Tamaina molekular ezberdinetako proteinak bereizteko metodo nagusiak dialisia, ultrairagazkia, gelen iragazketa eta bereizketa zentrifugoa dira. Dialisia eta ultrairagazkia proteinak bereizteko metodoetan erabili ohi dira. Bereizi nahi den dialisi-nahasketa mintz erdiiragazkorraz egindako dialisi-poltsa batean sartzen da, eta, ondoren, dialisi-soluzioan murgiltzen da bereizteko. Ultrairagazpena ura eta beste molekula txiki batzuk mintz erdi iragazkor batean indar zentrifugoa edo presioa erabiliz eta proteinak mintz erdi-iragazkorran harrapatzeko prozesua da. Bi metodo hauek proteinetan oinarritutako makromolekulatik eta gatz inorganikoetatik abiatuta molekula txikietatik bereiz daitezke. Askotan gatzatzen dira, gatza disolbatzeko metodoarekin batera erabiltzen dira, edo bi metodo horiek ateratzeko sar daitezke gatz-disoluzio ez-organikoak erabiliz gatzatu ondoren.

1. Nola araztu proteina gatz-metodoaren bidez: gatz-metodoaren oinarria gatz-disoluzio diluituan proteinen disolbagarritasuna handituko da gatz-kontzentrazioa handitzean, baina gatz-kontzentrazioa balio jakin batera igotzen denean, uraren jarduera areagotuko da. Jaitsiera, eta horrek, aldi berean, proteina batzuk egitura molekularraren gainazaletik kargak sortzea eragin dezake pixkanaka neutralizatzea, eta hidratazio-mintza pixkanaka suntsitzen da, eta horrek, azkenean, erlazionatutako proteinak eta molekulak aglomerazioa eta disoluzio desberdinetatik hauspeatzea eragin dezake.

2. Disolbatzaile organikoen prezipitazio-metodoa: disolbatzaile organikoetan proteinen disolbagarritasuna murrizteko bi arrazoi daude: proteina gatz-soluzio gisa nola araztu deshidratazioarekin; bigarrenik, ura baino disolbatzaile organikoen konstante dielektrikoa murriztu daiteke disolbatzaile polarretan.

3. Proteinen prezipitazio-agentea: proteinak prezipitazio-agente gisa proteina-hauspetatze mota batean edo batean baino ez du eragiten, ohikoak alkalinoak, proteinak, lektinak eta metal astunak dira.

4. Polietilenglikolaren prezipitazioa: nola araztu ur-disolbagarriak diren polimero ez-ionikoak.proteinen arazketa, hala nola, polietilenglikola eta sodio dextrano sulfatoa proteinak hauspeatzeko.


Argitalpenaren ordua: 2020-10-27