Meetodidvalgu puhastamine:

Valgu puhastamise, eraldamise ja puhastamise meetod, valk vabaneb algsetest rakkudest või kudedest lahustunud olekus ja jääb algsesse loomulikku olekusse ilma bioloogilist aktiivsust kaotamata. Sel põhjusel peaks materjal eemaldama loomse ja rasvkoe, seemnematerjal peaks isegi koorima seemnekesta saastumist sellistest ainetest nagu tanniinid ja õliseemne puhul tuleks eelistatavalt kasutada madala keemistemperatuuriga orgaanilist lahustit.

1. Valkude puhastamise meetod, suurus ja erinevad eraldusanalüüsi meetodid: dialüüs ja ultrafiltratsioon kasutavad neid valke molekulide olemuse läbimiseks, mis ei suuda läbida poolläbilaskvat membraani; tihedusgradienttsentrifuugimine Valgu kvaliteet ja tihedus söötmes avaldavad osakestele suuremat mõju. Settimiskiirus on kiirem; geelfiltreerimine on omamoodi kolonnkromatograafia.

2. Lahustuvuse erinevuse eraldamine kasutusel: elektrosadestamine, kuna valgu molekulide netolaeng on nullisoelektrilises punktis, mis vähendab molekulide vahelist elektrostaatilist tõukejõudu, on kergesti agregeeritav ja minimaalne lahustuvus; soolalahusega kasutatav soolalahus Kontsentratsioon suurendab või vähendab valgu lahustuvust.

3. Laengut eraldatakse ja analüüsitakse erinevate meetoditega, põhisisu hulka kuuluvad elektroforees ja ioonvahetuskromatograafia.

4. Meetodidvalgu puhastamineValkude selektiivne adsorptsioon ja eraldamine kasutavad osakeste adsorptsiooni tugevust.

5. Afiinsuskromatograafia põhineb ligandide eraldamisel. See bioloogiline omadus võimaldab valgumolekulidel seostuda spetsiifiliselt, mitte kovalentselt teise molekuliga, mida nimetatakse ligandiks.

6. Valgu puhastamise meetod: Madala temperatuuriga orgaanilise lahusti sadestamise meetod: kasutage veega segunevaid orgaanilisi lahusteid, nagu metanool, etanool, et vähendada enamiku valkude lahustuvust ja sadenemist. See meetod on kõrgem kui väljasoolamise eraldusvõime, kuid valk denatureerub rohkem Kui lihtne, tuleks seda teha madalal temperatuuril.

Kuidas puhastadavalgu puhastamine:

Valkude puhastamiseks, valk on suur molekul ja albumiini erineva molekulmassiga, on mõned lihtsamad meetodid valgu ja väikese molekuliga materjalide eraldamiseks ning eraldatud valgu segu. Peamised meetodid erineva molekulmassiga valkude eraldamiseks on dialüüs, ultrafiltreerimine, geelfiltreerimine ja tsentrifugaaleraldus. Valkude eraldamise meetodites kasutatakse tavaliselt dialüüsi ja ultrafiltratsiooni. Eraldatav dialüüsisegu asetatakse poolläbilaskvast membraanist valmistatud dialüüsikotti ja seejärel kastetakse eraldamiseks dialüüsilahusesse. Ultrafiltratsioon on protsess, kus vesi ja muud väikesed molekulid läbivad poolläbilaskvas membraanis tsentrifugaaljõudu või rõhku ja püütakse valgud poolläbilaskvas membraanis. Neid kahte meetodit saab eraldada valgupõhistest makromolekulidest ja anorgaanilistel sooladel põhinevatest väikestest molekulidest. Need soolatakse sageli välja, kasutatakse koos soola lahustamise meetodiga või neid saab kasutada nende kahe meetodi eemaldamiseks pärast anorgaaniliste soolalahuste abil väljasoolamist.

1. Kuidas puhastada valku väljasoolamise meetodil: väljasoolamise meetodi aluseks on see, et valgu lahustuvus lahjendatud soolalahuses suureneb koos soola kontsentratsiooni suurenemisega, kuid kui soola kontsentratsioon tõuseb teatud väärtuseni, vee aktiivsus suureneb. Vähenemine, mis omakorda võib põhjustada mõnede valkude laenguid genereeriva molekulaarstruktuuri pinna järkjärgulise neutraliseerimise ja hüdratatsioonimembraani järkjärgulise hävimise, mis võib lõpuks põhjustada seotud valkude ja molekulide aglomeratsiooni ja sadestumist erinevatest lahustest.

2. Orgaanilise lahustiga sadestamise meetod: Valgu lahustuvuse vähendamiseks orgaanilistes lahustites on kaks põhjust: kuidas puhastada valku soolalahusena dehüdratsiooniga; teiseks saab polaarsetes lahustites vähendada orgaaniliste lahustite dielektrilist konstanti kui vees.

3. Valgu sadestav aine: valk sadestava ainena toimib ainult ühte tüüpi valgu sadestumise korral, tavalised on leeliselised, valgud, lektiinid ja raskmetallid.

4. Polüetüleenglükooli sadestamine: kuidas puhastada vees lahustuvaid mitteioonseid polümeerevalgu puhastamine, nagu polüetüleenglükool ja naatriumdekstraansulfaat valkude sadestamiseks.