La separación y purificación de proteínas se utiliza ampliamente en la investigación y aplicación de la bioquímica y es una habilidad operativa importante. Una célula eucariota típica puede contener miles de proteínas diferentes, algunas son muy ricas y otras contienen sólo unas pocas copias. Para estudiar un determinadoproteína, primero es necesario purificar la proteína de otras proteínas y moléculas no proteicas.

1. Método de salazón deproteína:

La sal neutra tiene un efecto significativo sobre la solubilidad de las proteínas. Generalmente, con el aumento de la concentración de sal en condiciones de baja concentración de sal, aumenta la solubilidad de la proteína. A esto se le llama salazón; Cuando la concentración de sal continúa aumentando, la solubilidad de las proteínas disminuye en diversos grados y se separa una tras otra. Este fenómeno se llama salazón.

2. Método de apilamiento de puntos isoeléctricos:

La repulsión electrostática entre partículas es menor cuando la proteína es estática, por lo que la solubilidad también es menor. Los puntos isoeléctricos de varias proteínas son diferentes. El pH de la solución acondicionadora se puede utilizar para alcanzar el punto isoeléctrico de una proteína y hacer que se acumule, pero este método rara vez se utiliza solo y puede combinarse con el método de sal.

3.Diálisis y ultrafiltración:

La diálisis utiliza una membrana semipermeable para separar proteínas de diferentes tamaños moleculares. El método de ultrafiltración utiliza alta presión o fuerza centrífuga para hacer que el agua y otras pequeñas moléculas de soluto pasen a través de una membrana semipermeable, mientras que elproteínapermanece en la membrana. Puede elegir diferentes tamaños de poros para interceptar proteínas de diferentes pesos moleculares.

4.Método de filtración en gel:

También llamada cromatografía de exclusión por tamaño o cromatografía de tamiz molecular, este es uno de los métodos más útiles para separar mezclas de proteínas según el tamaño molecular. Los materiales de relleno más utilizados en la columna son gel de glucosa (Sephadex ged) y gel de agarosa (gel de agarosa).

5.Electroforesis:

Bajo la misma condición de pH, se pueden separar varias proteínas debido a sus diferentes pesos moleculares y diferentes cargas en el campo eléctrico. Vale la pena prestar atención a la electroforesis isoeléctrica, que utiliza un anfolito como portador. Durante la electroforesis, el anfolito forma un gradiente de pH que se agrega gradualmente desde el electrodo positivo al electrodo negativo. Cuando una proteína con una determinada carga nada en él, se alcanzarán entre sí. La posición del pH del punto eléctrico es discontinua y este método se puede utilizar para analizar y preparar varias proteínas.

6.Cromatografía de comunicación iónica:

Los agentes de comunicación iónica incluyen agentes de comunicación catiónicos (tales como carboximetilcelulosa; CM-celulosa) y agentes de comunicación aniónicos (dietilaminoetilcelulosa). Al pasar a través de la columna de cromatografía de comunicación iónica, la proteína con carga opuesta al agente de comunicación iónico se adsorbe en el agente de comunicación iónico y luego el adsorbido.proteínase eluye cambiando el pH o la fuerza iónica.

7.Cromatografía de afinidad:

La cromatografía de afinidad es un método extremadamente útil para separar proteínas. A menudo, solo se requiere un paso para separar una determinada proteína que se va a purificar de una mezcla de proteínas desordenada con alta pureza.

Este método se basa en la unión específica, en lugar de covalente, de determinadas proteínas a otra molécula llamada ligando (Ligando).

El principio básico:

Las proteínas existen en una mezcla desordenada en los tejidos o células, y cada tipo de célula contiene miles de proteínas diferentes. Por tanto, la distinción entre proteínas es una parte importante de la bioquímica, y no ha sido la única. O un conjunto de métodos ya preparados puede eliminar cualquier tipo de proteína de una proteína mezclada desordenada, por lo que a menudo se usan varios métodos en combinación.