Kio estas la puriga metodo de lasistemo de purigado de proteinoj? Estas necese scii la kodan DNA-sekvencon de la purigita proteino, por vidi kiuj ĉeloj aŭ histoj estas troesprimitaj en la celgeno, kaj dizajni genenkondukojn por plifortigi la arf de la cela DNA-fragmento. Tio estas la tielnomita akiro de celgenaj fragmentoj.

Konstruo de esprimvektoro: En la prokariota aŭ eŭkariota esprimvektoro kun la karakterizaĵoj de la akirita genesprimo mem, la ĉefproblemo de tiu paŝo estas konstrui la plasmidon kaj la genon de intereso, kaj la esprimsistemon. La prokariota esprimtempo estas mallonga, la kosto estas malalta, kaj granda kvanto de esprimo estas prioritato; la geno ne estas esprimita en E. coli, kaj la problemo okazas en kodonoptimumigo. Konsiderante pli bonan agadon kaj purigon de la proteino, la esploristoj elektis esprimi en Pichi feĉo. Sukcesa esprimo de kodona optimumigo estas grava.

Kio estas la puriga metodo de la proteinpuriga sistemo:

1. Precipitaĵo.

2. Elektroforezo: ŝarĝita proteino estas pli alta aŭ pli malalta ol ĝia izoelektra punkto kaj povas esti movita al la negativa elektrodo aŭ la pozitiva elektrodo de la elektra kampo en la elektra kampo. Subtenu filmelektroforezon, elektroforezon, ktp.

3. Dializo: Metodo, kiu uzas du dializajn sakojn por apartigi grandajn molekulojn de proteinoj kaj malgrandaj molekulaj organikaj komponaĵoj.

4. Kromatografio: Jona interŝanĝa kromatografio uzas la liberajn ecojn de proteinoj. Sub specifa pH, la ŝargoj kaj trajtoj de proteinoj estas malsamaj, kaj ili povas esti apartigitaj per interŝanĝa kromatografio. En anjoninterŝanĝa kromatografio, proteinoj kun malalta negativa potenco unue estas eluitaj. Molekulaj kribriloj, ankaŭ konataj kiel ĝela filtrado. Malgrandaj proteinoj eniras la porojn kaj restas en ili dum longa tempo. Grandaj proteinoj ne povas eniri la porojn kaj elflui rekte.

5. Kio estas la puriga metodo de lasistemo de purigado de proteinoj? Ultracentrifugado: Proteinpurigo povas esti uzata por determini la molekula pezo kaj povas esti uzata kiel la proteino. La formado de proteinoj kun malsamaj densecoj estas apartigita.