Nuklea acido estas dividita en deoksiribonukleika acido (DNA) kaj ribonukleika acido (RNA), inter kiuj RNA povas esti dividita en ribosoma RNA (rRNA), mesaĝa RNA (mRNA) kaj transiga RNA (tRNA) laŭ malsamaj funkcioj.

DNA estas ĉefe koncentrita en la nukleo, mitokondrioj kaj kloroplastoj, dum RNA estas plejparte distribuita en la citoplasmo.

Ĉar purinbazoj kaj pirimidinbazoj havas konjugatajn duoblajn ligojn en nukleaj acidoj, nukleaj acidoj havas la karakterizaĵojn de ultraviola sorbado. La ultraviola sorbado de DNA-natriaj saloj estas ĉirkaŭ 260nm, kaj ĝia sorbado estas esprimita kiel A260, kaj ĝi estas ĉe la sorba trogo je 230nm, do transviola spektroskopio povas esti uzata. Nukleaj acidoj estas kvante kaj kvalite determinitaj per luminometro.

Nukleaj acidoj estas amfolitoj, kiuj estas ekvivalentaj al poliacidoj. Nukleaj acidoj povas esti disigitaj en anjonojn uzante neŭtralajn aŭ alkalajn bufrojn, kaj metitaj en kampon por moviĝi direkte al la anodo. Ĉi tio estas la principo de elektroforezo.

Principoj kaj postuloj pri eltiro kaj purigado de nuklea acido

1. Certigu la integrecon de la primara strukturo de nuklea acido

2. Forigi la poluadon de aliaj molekuloj (kiel ekskludi RNA-interferon kiam ĉerpas DNA)

3. Ne devus esti organikaj solviloj kaj altaj koncentriĝoj de metalaj jonoj, kiuj malhelpas enzimojn en specimenoj de nukleaj acidoj.

4. Redukti makromolekulajn substancojn kiel proteinojn, polisakaridojn kaj lipidojn kiel eble plej multe

Metodo de eltiro kaj purigado de nuklea acido

1. Fenolo/kloroforma eltira metodo

Ĝi estis inventita en 1956. Post traktado de la ĉelo rompita likvaĵo aŭ histo-homogenato per fenolo/kloroformo, la nukleaj acidaj komponantoj, ĉefe DNA, estas solvita en la akva fazo, lipidoj estas ĉefe en la organika fazo, kaj proteinoj situas inter la du. fazoj.

2. Alkohola precipitaĵo

Etanolo povas forigi la hidratan tavolon de nuklea acido kaj elmontri la negative ŝargitan fosfatgrupon, kaj pozitive ŝargitaj jonoj kiel NA﹢ povas kombini kun la fosfata grupo por formi precipitaĵon.

3. Kromatografia kolumna metodo

Per la speciala silic-bazita adsorba materialo, DNA povas esti specife adsorbita, dum RNA kaj proteino povas trapasi glate, kaj tiam uzi altan salon kaj malaltan pH por ligi nuklean acidon, kaj elui per malalta salo kaj alta pH por apartigi kaj purigi nuklean. acido.

4. Termika krakado alkala metodo

Alkala ekstraktado plejparte uzas la topologiajn diferencojn inter kovalente fermitaj cirklaj plasmidoj kaj lineara kromatino por apartigi ilin. Sub alkalaj kondiĉoj, denaturigitaj proteinoj estas solveblaj.

5. Metodo de bolado de pirolizo

La DNA-solvo estas varmotraktita por ekspluati la trajtojn de liniaj DNA-molekuloj por apartigi DNA-fragmentojn de la precipitaĵo formita per denaturigitaj proteinoj kaj ĉelaj derompaĵoj per centrifugado.

6. Nanomagnetaj bidoj metodo

Uzante nanoteknologion por plibonigi kaj modifi la surfacon de superparamagnetaj nanopartikloj, superparamagnetaj siliciooksidaj nanomagnetaj bidoj estas preparitaj. La magnetaj bidoj povas specife rekoni kaj efike ligi al nukleaj acidaj molekuloj sur mikroskopa interfaco. Uzante la superparamagnetajn ecojn de silikaj nanosferoj, sub la ago de Kaotropaj saloj (guanidina klorhidrato, guanidina izotiocianato, ktp.) kaj ekstera magneta kampo, DNA kaj RNA estis izolitaj de sango, besta histo, manĝaĵo, patogenaj mikroorganismoj kaj aliaj specimenoj.