La apartigo kaj purigo de proteinoj estas vaste uzataj en biokemia esplorado kaj apliko kaj estas grava funkcia kapablo. Tipa eŭkariota ĉelo povas enhavi milojn da malsamaj proteinoj, kelkaj estas tre riĉaj kaj kelkaj enhavas nur kelkajn kopiojn. Por studi certanproteino, necesas unue purigi la proteinon de aliaj proteinoj kaj ne-proteinaj molekuloj.

1. Saling-el metodo deproteino:

Neŭtrala salo havas gravan efikon sur la solvebleco de proteino. Ĝenerale, kun la pliiĝo de salokoncentriĝo sub malalta sala koncentriĝo, la solvebleco de proteino pliiĝas. Ĉi tio nomiĝas salado; kiam la sala koncentriĝo daŭre pliiĝas, La solvebleco de proteino malpliiĝas je diversaj gradoj kaj disiĝas unu post la alia. Ĉi tiu fenomeno nomiĝas elsalado.

2. Izoelektra punkto stakmetodo:

La elektrostatika repuŝo inter partikloj estas la plej malgranda kiam la proteino estas senmova, do la solvebleco estas ankaŭ la plej malgranda. La izoelektraj punktoj de diversaj proteinoj estas malsamaj. La pH de la kondiĉiga solvaĵo povas esti uzata por atingi la izoelektran punkton de proteino Faru ĝin akumuliĝi, sed ĉi tiu metodo malofte estas uzata sole kaj povas esti kombinita kun la saliga metodo.

3.Dializo kaj ultrafiltrado:

Dializo uzas duonpenetreblan membranon por apartigi proteinojn de malsamaj molekulaj grandecoj. La ultrafiltra metodo uzas altan premon aŭ centrifugan forton por igi akvon kaj aliajn malgrandajn solvmolekulojn trapasi duontrapenetreblan membranon, dum laproteinorestas sur la membrano. Vi povas elekti malsamajn porajn grandecojn por kapti proteinojn de malsamaj molekulaj pezoj.

4.Gela filtra metodo:

Ankaŭ nomita grandekskluda kromatografio aŭ molekula kribrilkromatografio, tio estas unu el la plej utilaj metodoj por apartigi proteinajn miksaĵojn laŭ molekula grandeco. La pli ofte uzitaj pakmaterialoj en la kolono estas glukozoĝelo (Sephadex ged) kaj agaroseĝelo (agaroseĝelo).

5. Elektroforezo:

Sub la sama pH-kondiĉo, diversaj proteinoj povas esti apartigitaj pro siaj malsamaj molekulaj pezoj kaj malsamaj ŝargoj en la elektra kampo. Indas atenti izoelektran aran elektroforezon, kiu uzas amfoliton kiel portanton. Dum elektroforezo, la amfolito formas pH-gradienton iom post iom aldonitan de la pozitiva elektrodo ĝis la negativa elektrodo. Kiam la proteino kun certa ŝargo naĝas en ĝi, ĝi atingos unu la alian. La pH-pozicio de la elektra punkto estas malkontinua, kaj ĉi tiu metodo povas esti uzata por analizi kaj prepari diversajn proteinojn.

6. Jona komunikado-kromatografio:

jonaj komunikadagentoj inkludas katjonajn komunikadagentojn (kiel ekzemple karboksimetil-celulozo; CM-celulozo) kaj anjonajn komunikadagentojn (dietilaminoetilcelulozo). Trapasante la jonkomunikan kromatografiokolumnon, la proteino kun la kontraŭa ŝargo al la jonkomunika agento estas adsorbita sur la jona komunikado-agento, kaj tiam la adsorbita.proteinoestas elvita ŝanĝante la pH aŭ jonan forton.

7. Afineca kromatografio:

Afineckromatografio estas ekstreme utila metodo por apartigi proteinojn. Ofte postulas nur unu paŝon por apartigi certan proteinon por esti purigita de senorda proteina miksaĵo kun alta pureco.

Tiu metodo estas bazita sur la specifa prefere ol kovalenta ligado de certaj proteinoj al alia molekulo nomita Peranto (Ligando).

La baza principo:

proteinoj ekzistas en senorda miksaĵo en histoj aŭ ĉeloj, kaj ĉiu speco de ĉelo enhavas milojn da malsamaj proteinoj. Tial, la distingo inter proteinoj estas grava parto de biokemio, kaj ĝi ne estis sola. Aŭ aro de pretaj metodoj povas forigi ajnan specon de proteino de senorda miksita proteino, do pluraj metodoj ofte estas uzataj en kombinaĵo.