Ο διαχωρισμός και ο καθαρισμός των πρωτεϊνών χρησιμοποιείται ευρέως στην έρευνα και την εφαρμογή της βιοχημείας και είναι μια σημαντική επιχειρησιακή δεξιότητα. Το SCG Protein Purification System Company-Saipu Instrument έχει συντάξει το περιεχόμενο ακατέργαστου διαχωρισμού και λεπτού διαχωρισμού τουπρωτεΐνηκάθαρση για όλους. Ένα τυπικό ευκαρυωτικό κύτταρο μπορεί να περιέχει χιλιάδες διαφορετικές πρωτεΐνες, μερικές είναι πολύ πλούσιες και άλλες περιέχουν μόνο λίγα αντίγραφα. Προκειμένου να μελετηθεί μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη, είναι απαραίτητο να καθαριστεί πρώτα η πρωτεΐνη από άλλες πρωτεΐνες και μη πρωτεϊνικά μόρια.

Χοντρός διαχωρισμός

Όταν ληφθεί το εκχύλισμα πρωτεΐνης (μερικές φορές αναμεμειγμένο με νουκλεϊκά οξέα, πολυσακχαρίτες κ.λπ.), επιλέγεται ένα σύνολο κατάλληλων μεθόδων για να διαχωριστεί η επιθυμητήπρωτεΐνηαπό άλλες ακαθαρσίες. Γενικά, αυτό το βήμα διαχωρισμού χρησιμοποιεί μεθόδους όπως εξάλειψη, συσσώρευση ισοηλεκτρικού σημείου και κλασμάτωση οργανικού διαλύτη. Αυτές οι μέθοδοι χαρακτηρίζονται από απλότητα και μεγάλη ικανότητα επεξεργασίας, η οποία μπορεί να αφαιρέσει πολλές ακαθαρσίες και να συμπυκνώσει το διάλυμα πρωτεΐνης. Ορισμένα εκχυλίσματα πρωτεϊνών είναι μεγάλα σε όγκο και δεν είναι κατάλληλα για συμπύκνωση με συσσώρευση ή αλάτισμα. Μπορείτε να επιλέξετε υπερδιήθηση, διήθηση γέλης, ξήρανση υπό κενό κατάψυξης ή άλλες μεθόδους συμπύκνωσης.

Λεπτός διαχωρισμός

Μετά την πρόχειρη κλασμάτωση του δείγματος, ο όγκος είναι γενικά μικρός και οι περισσότερες ακαθαρσίες έχουν αφαιρεθεί. Για περαιτέρω καθαρισμό, οι μέθοδοι χρωματογραφίας περιλαμβάνουν γενικά διήθηση γέλης, χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων, χρωματογραφία προσρόφησης και χρωματογραφία συγγένειας. Εάν είναι απαραίτητο, μπορείτε επίσης να επιλέξετε ηλεκτροφόρηση, συμπεριλαμβανομένης της ηλεκτροφόρησης ζώνης, του ισοηλεκτρικού σημείου κ.λπ. ως την τελική διαδικασία καθαρισμού. Η μέθοδος που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό σε επίπεδο υποδιαίρεσης είναι γενικά μικρή στον σχεδιασμό, αλλά με υψηλή ανάλυση.

Η κρυστάλλωση είναι η τελική διαδικασία διαχωρισμού και καθαρισμού πρωτεϊνών. Αν και η διαδικασία κρυστάλλωσης δεν διασφαλίζει ότι η πρωτεΐνη πρέπει να είναι ομοιόμορφη, μόνο όταν μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη έχει το πλεονέκτημα στο διάλυμα να σχηματίσει έναν κρύσταλλο. Η ίδια η διαδικασία κρυστάλλωσης συνοδεύεται από έναν ορισμένο βαθμό καθαρισμού και η ανακρυστάλλωση μπορεί να αφαιρέσει μια μικρή ποσότητα νοθευμένης πρωτεΐνης. Αφού μετουσιώθηκεπρωτεΐνηδεν έχει βρεθεί ποτέ κατά τη διαδικασία κρυστάλλωσης, η κρυστάλλωση πρωτεϊνών δεν είναι μόνο ένα σημάδι καθαρότητας, αλλά και μια ισχυρή οδηγία για να προσδιοριστεί ότι το προϊόν βρίσκεται στη φυσική του κατάσταση.