Methoden vonProteinreinigung:

Bei der Methode der Proteinreinigung, Trennung und Reinigung von Proteinen wird das Protein in gelöstem Zustand aus den ursprünglichen Zellen oder Geweben freigesetzt und verbleibt im ursprünglichen natürlichen Zustand ohne Verlust der biologischen Aktivität. Aus diesem Grund sollte das Material Tier- und Fettgewebe entfernen, das Samenmaterial sollte sogar die Verunreinigung der Samenschale durch Substanzen wie Tannine ablösen und die Ölsaat sollte vorzugsweise ein niedrigsiedendes organisches Lösungsmittel verwenden.

1. Die Methode der Proteinreinigung, Größe und verschiedene Trennanalysemethoden: Dialyse und Ultrafiltration nutzen diese Proteine, um die Natur von Molekülen zu passieren, die die semipermeable Membran nicht passieren können; Dichtegradientenzentrifugation Die Qualität und Dichte des Proteins im Medium hat einen größeren Einfluss auf die Partikel. Die Absetzgeschwindigkeit ist schneller; Die Gelfiltration ist eine Art Säulenchromatographie.

2. Trennung des Löslichkeitsunterschieds bei der Verwendung: Elektrofällung, da die Nettoladung der Proteinmoleküle am isoelektrischen Punkt Null liegt, wodurch die elektrostatische Abstoßung zwischen Molekülen verringert wird, leicht zu aggregieren ist und die Löslichkeit minimal ist; Salzlösung verwendet mit Salzlösung Die Konzentration erhöht oder verringert die Löslichkeit des Proteins.

3. Die Ladung wird mit verschiedenen Methoden getrennt und analysiert. Die Hauptinhalte umfassen Elektrophorese und Ionenaustauschchromatographie.

4. Methoden vonProteinreinigungDie selektive Adsorption und Trennung von Proteinen nutzt die Stärke der Partikeladsorption.

5. Die Affinitätschromatographie basiert auf der Trennung von Liganden. Diese biologische Eigenschaft ermöglicht es Proteinmolekülen, sich spezifisch und nicht kovalent an ein anderes Molekül, einen sogenannten Liganden, zu binden.

6. Methode zur Proteinreinigung: Fällungsmethode mit organischen Lösungsmitteln bei niedriger Temperatur: Verwenden Sie organische Lösungsmittel, die mit Wasser mischbar sind, wie z. B. Methanol, Ethanol, um die Löslichkeit und Ausfällung der meisten Proteine ​​zu verringern. Diese Methode hat eine höhere Auflösung als das Aussalzen, aber das Protein denaturiert stärker. Wenn es einfach ist, sollte es bei niedriger Temperatur durchgeführt werden.

So reinigen SieProteinreinigung:

Wie man Protein reinigt, ist Protein ein großes Molekül und Albumin verschiedener Molekülgrößen. Es gibt einige einfachere Methoden zur Trennung von Protein und kleinen Molekülmaterialien sowie zur Trennung von Proteinmischungen. Die wichtigsten Methoden zur Trennung von Proteinen unterschiedlicher Molekülgröße sind Dialyse, Ultrafiltration, Gelfiltration und Zentrifugaltrennung. Dialyse und Ultrafiltration werden häufig bei Methoden zur Proteintrennung eingesetzt. Das zu trennende Dialysegemisch wird in einen Dialysebeutel aus einer semipermeablen Membran gegeben und anschließend zur Trennung in die Dialyselösung getaucht. Bei der Ultrafiltration werden Wasser und andere kleine Moleküle mithilfe von Zentrifugalkraft oder Druck durch eine semipermeable Membran geleitet und Proteine ​​in der semipermeablen Membran eingefangen. Diese beiden Methoden können von proteinbasierten Makromolekülen und kleinen Molekülen auf anorganischer Salzbasis getrennt werden. Sie werden häufig ausgesalzen, in Verbindung mit der Salzlösungsmethode verwendet oder können zur Beseitigung dieser beiden Methoden nach dem Aussalzen mit anorganischen Salzlösungen eingeführt werden.

1. So reinigen Sie Protein durch die Aussalzmethode: Die Grundlage der Aussalzmethode ist, dass die Löslichkeit des Proteins in verdünnter Salzlösung mit zunehmender Salzkonzentration zunimmt, aber wenn die Salzkonzentration auf einen bestimmten Wert ansteigt Die Wasseraktivität wird erhöht. Abnahme, was wiederum dazu führen kann, dass einige Proteine ​​Ladungen durch die Oberfläche der Molekülstruktur erzeugen, die allmählich neutralisiert werden, und die Hydratationsmembran wird allmählich zerstört, was schließlich dazu führen kann, dass verwandte Proteine ​​und Moleküle eine Agglomeration entwickeln und aus verschiedenen Lösungen ausfallen.

2. Fällungsmethode mit organischem Lösungsmittel: Es gibt zwei Gründe, die Löslichkeit von Protein in organischen Lösungsmitteln zu verringern: wie man Protein als Salzlösung durch Dehydratisierung reinigt; Zweitens kann die Dielektrizitätskonstante organischer Lösungsmittel in polaren Lösungsmitteln niedriger sein als die von Wasser.

3. Protein-Fällungsmittel: Protein als Fällungsmittel wirkt nur auf eine oder eine Art der Proteinfällung, üblich sind Alkali, Protein, Lektin und Schwermetalle.

4. Polyethylenglykolfällung: So reinigen Sie wasserlösliche nichtionische Polymere fürProteinreinigung, wie Polyethylenglykol und Natriumdextransulfat, um Proteine ​​auszufällen.