Adskillelse og oprensning af proteiner er meget brugt i biokemisk forskning og anvendelse og er en vigtig operationel færdighed. En typisk eukaryot celle kan indeholde tusindvis af forskellige proteiner, nogle er meget rige og nogle kun indeholder få kopier. For at studere en bestemtprotein, er det nødvendigt først at rense proteinet fra andre proteiner og ikke-proteinmolekyler.

1. Udsaltning metode afprotein:

Neutralt salt har en betydelig effekt på opløseligheden af ​​protein. Generelt, med stigningen af ​​saltkoncentrationen under lav saltkoncentration, øges opløseligheden af ​​protein. Dette kaldes saltning; når saltkoncentrationen fortsætter med at stige, falder proteinets opløselighed i varierende grad og skilles ud efter hinanden. Dette fænomen kaldes udsaltning.

2. Isoelektrisk punktstablingsmetode:

Den elektrostatiske frastødning mellem partikler er den mindste, når proteinet er statisk, så opløseligheden er også den mindste. De isoelektriske punkter af forskellige proteiner er forskellige. Konditioneringsopløsningens pH kan bruges til at nå det isoelektriske punkt af et protein Få det til at akkumulere, men denne metode bruges sjældent alene og kan kombineres med udsaltning-metoden.

3. Dialyse og ultrafiltrering:

Dialyse bruger en semipermeabel membran til at adskille proteiner af forskellige molekylstørrelser. Ultrafiltreringsmetoden bruger højtryk eller centrifugalkraft til at få vand og andre små opløste molekyler til at passere gennem en semipermeabel membran, mensproteinforbliver på membranen. Du kan vælge forskellige porestørrelser for at opsnappe proteiner med forskellig molekylvægt.

4. Gelfiltreringsmetode:

Også kaldet størrelsesudelukkelseskromatografi eller molekylsigtekromatografi, dette er en af ​​de mest nyttige metoder til at adskille proteinblandinger i henhold til molekylstørrelse. De mere almindeligt anvendte pakningsmaterialer i kolonnen er glucosegel (Sephadex ged) og agarosegel (agarosegel).

5. Elektroforese:

Under samme pH-forhold kan forskellige proteiner adskilles på grund af deres forskellige molekylvægte og forskellige ladninger i det elektriske felt. Det er værd at være opmærksom på isoelektrisk sæt elektroforese, som bruger en amfolyt som bærer. Under elektroforese danner amfolytten en pH-gradient, der gradvist tilføjes fra den positive elektrode til den negative elektrode. Når proteinet med en vis ladning svømmer i det, vil det nå hinanden. PH-positionen af ​​det elektriske punkt er diskontinuerlig, og denne metode kan bruges til at analysere og fremstille forskellige proteiner.

6. Ionkommunikationskromatografi:

ionkommunikationsmidler indbefatter kationiske kommunikationsmidler (såsom carboxymethylcellulose; CM-cellulose) og anioniske kommunikationsmidler (diethylaminoethylcellulose). Når det passerer gennem ionkommunikationskromatografisøjlen, adsorberes proteinet med den modsatte ladning til ionkommunikationsmidlet på ionkommunikationsmidlet, og derefter det adsorberedeproteinelueres ved at ændre pH eller ionstyrke.

7. Affinitetskromatografi:

Affinitetskromatografi er en yderst nyttig metode til adskillelse af proteiner. Det kræver ofte kun et trin at adskille et bestemt protein, der skal renses, fra en rodet proteinblanding med høj renhed.

Denne metode er baseret på den specifikke snarere end kovalente binding af visse proteiner til et andet molekyle kaldet en ligand (Ligand).

Grundprincippet:

proteiner findes i en rodet blanding i væv eller celler, og hver type celle indeholder tusindvis af forskellige proteiner. Derfor er skelnen mellem proteiner en vigtig del af biokemien, og den har ikke været alene. Eller et sæt færdige metoder kan fjerne enhver form for protein fra et rodet blandet protein, så flere metoder bruges ofte i kombination.