Mae gwahanu a phuro proteinau yn cael ei ddefnyddio'n helaeth mewn ymchwil a chymhwyso biocemeg ac mae'n sgil gweithredol pwysig. Gall cell ewcaryotig nodweddiadol gynnwys miloedd o wahanol broteinau, mae rhai yn gyfoethog iawn a rhai yn cynnwys ychydig gopïau yn unig. Er mwyn astudio penodolprotein, mae angen puro'r protein o broteinau eraill a moleciwlau nad ydynt yn brotein yn gyntaf.

1. Dull halltu-allan oprotein:

Mae halen niwtral yn cael effaith sylweddol ar hydoddedd protein. Yn gyffredinol, gyda chynnydd crynodiad halen o dan grynodiad halen isel, mae hydoddedd protein yn cynyddu. Gelwir hyn yn halltu; pan fydd y crynodiad halen yn parhau i gynyddu, Mae hydoddedd protein yn gostwng i raddau amrywiol ac yn gwahanu un ar ôl y llall. Gelwir y ffenomen hon yn halltu.

2. Dull stacio pwynt isoelectric:

Y gwrthyriad electrostatig rhwng gronynnau yw'r lleiaf pan fo'r protein yn statig, felly'r hydoddedd yw'r lleiaf hefyd. Mae pwyntiau isoelectric gwahanol broteinau yn wahanol. Gellir defnyddio pH yr hydoddiant cyflyru i gyrraedd pwynt isoelectric protein Gwnewch iddo gronni, ond anaml y defnyddir y dull hwn ar ei ben ei hun a gellir ei gyfuno â'r dull halltu.

3.Dialysis a ultrafiltration:

Mae dialysis yn defnyddio pilen lled-athraidd i wahanu proteinau o wahanol feintiau moleciwlaidd. Mae'r dull ultrafiltration yn defnyddio gwasgedd uchel neu rym allgyrchol i wneud i ddŵr a moleciwlau hydoddyn bach eraill basio trwy bilen lled-athraidd, tra bod yproteinyn parhau i fod ar y bilen. Gallwch ddewis gwahanol feintiau mandwll i ryng-gipio proteinau o wahanol bwysau moleciwlaidd.

Dull hidlo 4.Gel:

Fe'i gelwir hefyd yn gromatograffaeth eithrio maint neu gromatograffaeth rhidyll moleciwlaidd, dyma un o'r dulliau mwyaf defnyddiol ar gyfer gwahanu cymysgeddau protein yn ôl maint moleciwlaidd. Y deunyddiau pacio a ddefnyddir amlaf yn y golofn yw gel glwcos (Sephadex ged) a gel agarose (gel agarose).

5.Electrofforesis:

O dan yr un cyflwr pH, gellir gwahanu proteinau amrywiol oherwydd eu pwysau moleciwlaidd gwahanol a gwahanol daliadau yn y maes trydan. Mae'n werth talu sylw i electrofforesis set isoelectric, sy'n defnyddio amffolyte fel cludwr. Yn ystod electrofforesis, mae'r amffolyte yn ffurfio graddiant pH a ychwanegir yn raddol o'r electrod positif i'r electrod negyddol. Pan fydd y protein â thâl penodol yn nofio ynddo, bydd yn cyrraedd ei gilydd. Mae safle pH y pwynt trydanol yn amharhaol, a gellir defnyddio'r dull hwn i ddadansoddi a pharatoi proteinau amrywiol.

cromatograffaeth cyfathrebu 6.ion:

mae asiantau cyfathrebu ïon yn cynnwys asiantau cyfathrebu cationig (fel cellwlos carboxymethyl; CM-cellwlos) ac asiantau cyfathrebu anionig (cellwlos diethylaminoethyl). Wrth basio trwy'r golofn cromatograffaeth cyfathrebu ïon, mae'r protein â'r gwefr gyferbyn â'r asiant cyfathrebu ïon yn cael ei arsugnu ar yr asiant cyfathrebu ïon, ac yna'r arsugniadproteinyn cael ei osgoi trwy newid y pH neu'r cryfder ïonig.

7. Cromatograffaeth Affinity:

Mae cromatograffaeth affinedd yn ddull hynod ddefnyddiol o wahanu proteinau. Yn aml, dim ond un cam sydd ei angen i wahanu protein penodol i'w buro o gymysgedd protein anniben â phurdeb uchel.

Mae'r dull hwn yn seiliedig ar rwymo penodol yn hytrach na chofalent o broteinau penodol i foleciwl arall o'r enw ligand (Ligand).

Yr egwyddor sylfaenol:

mae proteinau yn bodoli mewn cymysgedd blêr mewn meinweoedd neu gelloedd, ac mae pob math o gell yn cynnwys miloedd o wahanol broteinau. Felly, mae'r gwahaniaeth rhwng proteinau yn rhan bwysig o fiocemeg, ac nid yw wedi bod ar ei ben ei hun. Neu gall set o ddulliau parod dynnu unrhyw fath o brotein o brotein cymysg blêr, felly mae sawl dull yn aml yn cael eu defnyddio mewn cyfuniad.