Cosa hè u metudu di purificazione di usistema di purificazione di prutezione? Hè necessariu cunnosce a sequenza di DNA codificante di a proteina purificata, per vede quali cellule o tessuti sò sopraespressi in u genu di destinazione, è di disegnà primers di gene per amplificà l'arf di u fragmentu di DNA di destinazione. Questa hè a chjamata acquisizione di frammenti di geni di destinazione.

Custruzzione di vettore d'espressione: In u vettore di espressione procarioticu o eucarioticu cù e caratteristiche di l'espressione genica ottenuta stessu, u prublema principali di stu passu hè di custruisce u plasmidi è u genu di interessu, è u sistema di espressione. U tempu di spressione procarioticu hè cortu, u costu hè bassu, è una grande quantità di spressione hè una priorità; u genu ùn hè micca spressu in E. coli, è u prublema si trova in l'optimizazione di codon. In cunsiderà una megliu attività è purificazione di a proteina, i circadori anu sceltu di spressione in u levitu Pichi. L'espressione successu di l'ottimisazione di codon hè impurtante.

Chì ghjè u metudu di purificazione di u sistema di purificazione di a proteina:

1. Precipitazioni.

2. Electrophoresis: Una proteina carica hè più altu o più bassu di u so puntu isoelectric è pò esse spustatu à l'elettrodu negativu o l'elettrodu pusitivu di u campu elettricu in u campu elettricu. Supportu l'elettroforesi di film, l'elettroforesi, etc.

3. Dialisi: Un metudu chì usa dui sacchetti di dialisi per separà e grande molécule da e proteine ​​​​è i picculi composti organici moleculari.

4. Cromatografia: A cromatografia di scambiu di ioni usa e proprietà libere di e proteine. Sutta un pH specificu, i carichi è e proprietà di e prutezione sò diffirenti, è ponu esse siparati da a cromatografia di scambiu di ioni. In a cromatografia di scambiu d'anioni, i prutini cù u putere negativu bassu sò eluiti prima. Sieves moleculari, cunnisciuti ancu com'è filtrazione di gel. I picculi proteini entranu in i pori è stanu in elli per un bellu pezzu. I grandi proteini ùn ponu micca entra in i pori è esce direttamente.

5. Chì ghjè u metudu di purificazione di usistema di purificazione di prutezione? Ultracentrifugazione: A purificazione di a proteina pò esse usata per determinà u pesu moleculare è pò esse usata cum'è a proteina. A furmazione di proteini cù densità differenti hè separata.