SPE hè stata per decennii, è per una bona ragione. Quandu i scientisti volenu caccià i cumpunenti di fondo da i so campioni, sò affruntati cù a sfida di fà senza riduce a so capacità di determinà in modu precisu è precisu a presenza è a quantità di u so compostu d'interessu. SPE hè una tecnica chì i scientisti spessu usanu per aiutà à preparà i so campioni per l'instrumentazione sensitiva utilizata per l'analisi quantitativa. SPE hè robusta, travaglia per una larga gamma di tippi di mostra, è i novi prudutti è metudi SPE cuntinueghjanu à esse sviluppati. À u core di u sviluppu di quelli metudi hè una apprezzazione chì ancu s'è a parolla "cromatografia" ùn hè micca apparsu in u nome di a tecnica, SPE hè ancu una forma di separazione cromatografica.

SPE: A Cromatografia Silenziosa

Ci hè un vechju dittu "s'è un arbre casca in una furesta, è nimu hè vicinu à sente, face sempre un sonu?" Questa frase ci ricorda SPE. Puderia sembra stranu di dì, ma quandu pensemu à SPE, a quistione diventa "se una separazione hè accaduta è ùn ci hè micca un detector per registrà lu, a cromatografia hè veramente accaduta?" In u casu di SPE, a risposta hè un "sì!" Quandu si sviluppa o risolve un metudu SPE, pò esse assai utile per ricurdà chì SPE hè solu cromatografia senza u cromatogramma. Quandu pensate à questu, ùn era micca Mikhail Tsvet, cunnisciutu com'è "u babbu di a cromatografia", facendu ciò chì chjamemu "SPE" oghje? Quandu si separava i so mischii di pigmenti vegetali, lassendu a gravità i purtari, dissoluti in un solvente, attraversu un lettu di gessa in terra, era cusì sfarente di un metudu SPE mudernu?

Capisce u vostru Sample

Siccomu SPE hè basatu annantu à i principii cromatografichi, à u core di ogni bonu metudu SPE hè a relazione trà l'analite, a matrice, a fase stazionaria (u sorbente SPE) è a fase mobile (i solventi utilizati per lavà o eluzione di a mostra) .

Capisce a natura di a vostra mostra quant'è pussibule hè u megliu postu per principià si avete da sviluppà o risolve un metudu SPE. Per evitari prucessi è errore innecessarii durante u sviluppu di u metudu, a descrizzione di e proprietà fisiche è chimiche di i vostri analiti è di a matrice hè assai utile. Una volta chì sapete di a vostra mostra, sarete in una pusizioni megliu per currisponde à quella mostra cù un pruduttu SPE adattatu. Per esempiu, sapendu a polarità relative di l'analiti paragunate cù l'altri è a matrice pò aiutà à decide se l'usu di polarità per separà l'analite da a matrice hè l'approcciu ghjusta. Sapendu s'ellu i vostri analiti sò neutrali o ponu esiste in stati incaricati pò ancu aiutà à guidà à i prudutti SPE chì sò spicializati in a conservazione o l'eluzione di neutrali, spezie caricate positivamente o caricate negativamente. Questi dui cuncetti rapprisentanu dui di e proprietà di l'analite più cumunimenti utilizati per sfruttà quandu si sviluppanu metudi SPE è selezziunate i prudutti SPE. Se pudete descriverà i vostri analiti è i cumpunenti di matrice prominenti in questi termini, site nantu à a vostra manera di sceglie una bona direzzione per u sviluppu di u vostru metudu SPE.

Separazione per affinità

I principii chì definiscenu e separazioni chì si trovanu in una colonna LC, per esempiu, sò in ghjocu in una separazione SPE. U fundamentu di ogni separazione cromatografica hè di stabilisce un sistema chì hà varii gradi d'interazzione trà i cumpunenti di a mostra è e duie fasi prisenti in colonna o cartuccia SPE, a fase mobile è a fase stazionaria.

Unu di i primi passi per sentu còmode cù u sviluppu di u metudu SPE hè di avè una familiarità cù i dui tipi d'interazzione più cumunimenti incontrati impiegati in a separazione SPE: polarità è / o statu di carica.

Polarità

Sè avete aduprà a polarità per pulizziari a vostra mostra, una di e prime scelte chì avete da fà hè di decide quale "mode" hè megliu. Hè megliu di travaglià cù un mediu SPE relativamente polare è una fase mobile relativamente non polare (vale à dì u modu normale) o u cuntrariu, un mediu SPE relativamente non polare accumpagnatu da una fase mobile relativamente polare (vale à dì u modu inversu, cusì chjamatu solu perchè hè u cuntrariu). di u "modu normale" inizialmente stabilitu).

Mentre scopre i prudutti SPE, truverete chì e fasi SPE esistenu in una varietà di polarità. Inoltre, a scelta di u solvente di fase mobile offre ancu una larga gamma di polarità, spessu assai sintonizzabili attraversu l'usu di mischi di solventi, tamponi o altri additivi. Ci hè un gran gradu di finezza pussibule quandu utilizate differenzi di polarità cum'è a caratteristica chjave per sfruttà per separà i vostri analiti da l'interferenze di a matrice (o l'una di l'altru).

Basta à tene in mente u vechju adagiu di chimica "cum'è dissolve cum'è" quandu vi cunzidira a polarità cum'è u mutore per a separazione. Più un compostu hè simile à a polarità di una fase mobile o stazionaria, u più prubabile hè di interagisce più forte. L'interazzione più forte cù a fase stazionaria portanu à ritenzioni più longu nantu à u mediu SPE. L'interazzioni forti cù a fase mobile portanu à menu ritenzione è eluzione prima.

Statu di carica

Sì l'analiti d'interessu o esistenu sempre in un statu carcu o ponu esse messi in un statu carcu da e cundizioni di a suluzione in quale sò dissoluti (p.e. pH), allora un altru modu putente di separà da a matrice (o ogni altru) hè attraversu l'usu di i media SPE chì ponu attruverà cù una carica propria.

In questu casu, s'applicanu e regule classiche di attrazione elettrostatica. A cuntrariu di e separazioni chì si basanu nantu à e caratteristiche di polarità è u mudellu di l'interazzione "cum'è dissolve cum'è", l'interazzione di stati carichi operanu nantu à a regula di "l'opposti si attranu". Per esempiu, pudete avè un mediu SPE chì hà una carica positiva nantu à a so superficia. Per equilibrà quella superficia carica positivamente, ci hè tipicamenti una spezia carica negativa (un anione) inizialmente ligata à questu. Se u vostru analite caricatu negativamente hè introduttu in u sistema, hà a capacità di spustà l'anione inizialmente ligatu è interagisce cù a superficia SPE caricata positivamente. Questu risultatu in a retenzione di l'analite nantu à a fase SPE. Stu scambiamentu di l'anioni hè chjamatu "Anion Exchange" è hè solu un esempiu di a categuria più larga di i prudutti SPE "Ion Exchange". In questu esempiu, e spezie caricate positivamenti averebbenu un forte incitamentu per stà in a fase mobile è micca interagisce cù a superficia SPE caricata positivamente, perchè ùn anu micca esse ritenuti. È, salvu chì a superficia SPE avia altre caratteristiche in più di e so proprietà di scambiu di ioni, e spezie neutrali seranu ancu minimamente mantenite (ancu se tali prudutti SPE mischiati esistenu, chì vi permettenu di utilizà u scambiu di ioni è i meccanismi di ritenzione di fase inversa in u stessu mediu SPE. ).

Una distinzione impurtante da tene in mente quandu si usanu miccanismi di scambiu di ioni hè a natura di u statu di carica di l'analite. Se l'analite hè sempre carcu, indipendentemente da u pH di a suluzione chì hè in, hè cunsideratu una spezia "forte". Se l'analite hè carricu solu in certi cundizioni di pH, hè cunsideratu una spezia "debule". Questa hè una caratteristica impurtante per capiscenu i vostri analiti perchè determina quale tipu di media SPE aduprà. In termini ginirali, pensendu à l'opposti chì vanu inseme aiuterà quì. Hè cunsigliatu di cunghjuntà un sorbente SPE di scambiu di ioni debuli cù una spezia "forte" è un sorbente di scambiu di ioni forte cù un analita "debule".