La separació i purificació de proteïnes s'utilitza àmpliament en la investigació i l'aplicació de la bioquímica i és una habilitat operativa important. Una cèl·lula eucariota típica pot contenir milers de proteïnes diferents, algunes són molt riques i algunes contenen només unes poques còpies. Per estudiar un certproteïna, primer cal purificar la proteïna d'altres proteïnes i molècules no proteiques.

1. Mètode de salaó deproteïna:

La sal neutra té un efecte significatiu sobre la solubilitat de la proteïna. En general, amb l'augment de la concentració de sal sota concentració de sal baixa, la solubilitat de la proteïna augmenta. Això s'anomena salaó; quan la concentració de sal continua augmentant, la solubilitat de la proteïna disminueix en diferents graus i es separa una darrere l'altra. Aquest fenomen s'anomena salaó.

2. Mètode d'apilament de punts isoelèctrics:

La repulsió electrostàtica entre partícules és la més petita quan la proteïna és estàtica, de manera que la solubilitat també és la més petita. Els punts isoelèctrics de diverses proteïnes són diferents. El pH de la solució de condicionament es pot utilitzar per assolir el punt isoelèctric d'una proteïna Feu que s'acumuli, però aquest mètode rarament s'utilitza sol i es pot combinar amb el mètode de la sal.

3.Diàlisi i ultrafiltració:

La diàlisi utilitza una membrana semipermeable per separar proteïnes de diferents mides moleculars. El mètode d'ultrafiltració utilitza força centrífuga o alta pressió per fer que l'aigua i altres petites molècules de solut passin a través d'una membrana semipermeable, mentre que laproteïnaroman a la membrana. Podeu triar diferents mides de porus per interceptar proteïnes de diferents pesos moleculars.

4. Mètode de filtració de gel:

També anomenada cromatografia d'exclusió de mida o cromatografia de tamís molecular, aquest és un dels mètodes més útils per separar les mescles de proteïnes segons la mida molecular. Els materials d'embalatge més utilitzats a la columna són el gel de glucosa (Sephadex ged) i el gel d'agarosa (gel d'agarosa).

5.Electroforesi:

Sota la mateixa condició de pH, es poden separar diverses proteïnes a causa dels seus diferents pesos moleculars i diferents càrregues en el camp elèctric. Val la pena parar atenció a l'electroforesi de conjunt isoelèctric, que utilitza un amfòlit com a portador. Durant l'electroforesi, l'amfòlit forma un gradient de pH afegit gradualment des de l'elèctrode positiu a l'elèctrode negatiu. Quan la proteïna amb una determinada càrrega hi neda, s'arribarà entre elles. La posició del pH del punt elèctric és discontínua, i aquest mètode es pot utilitzar per analitzar i preparar diverses proteïnes.

6. Cromatografia de comunicació iònica:

Els agents de comunicació iònica inclouen agents de comunicació catiònics (com la carboximetil cel·lulosa; CM-cel·lulosa) i els agents de comunicació aniònics (dietilaminoetil cel·lulosa). En passar per la columna de cromatografia de comunicació iònica, la proteïna amb la càrrega oposada a l'agent de comunicació iònica s'adsorbeix a l'agent de comunicació iònica i després l'adsorbida.proteïnas'elueix canviant el pH o la força iònica.

7. Cromatografia d'afinitat:

La cromatografia d'afinitat és un mètode extremadament útil per separar proteïnes. Sovint només requereix un pas per separar una determinada proteïna per purificar-se d'una barreja desordenada de proteïnes amb alta puresa.

Aquest mètode es basa en la unió específica i no covalent de certes proteïnes a una altra molècula anomenada lligand (lligant).

El principi bàsic:

les proteïnes existeixen en una barreja desordenada en teixits o cèl·lules, i cada tipus de cèl·lula conté milers de proteïnes diferents. Per tant, la distinció entre proteïnes és una part important de la bioquímica, i no ha estat sola. O un conjunt de mètodes preparats pot eliminar qualsevol tipus de proteïna d'una proteïna barrejada desordenada, de manera que sovint s'utilitzen diversos mètodes en combinació.